1. 准备工作,开水浴锅,预热试剂,超净工作台紫外照射 30min,找到对应细胞在液氮罐中的位置
2. 紫外照射后风机吹 10min 后,酒精擦拭台面,放入试剂和离心管,取 15ml 离心管,加入 9ml 培养液
3. 在液氮罐中取出细胞,先拧松放液氮,再拧紧,将冻存管放入 PE 手套中,然后水浴融化后取出,1-2min
4. 将冻存管喷酒精后放入超净台内,擦干管壁,用 1ml 头将细胞转移到已加培养液的离心管中
5. 800-1000rpm 离心 5min,注意配平
6. 将离心好的细胞弃上清,加入 5ml 完全培养基重悬,用移液管吹打 8-10 次, 避免产生气泡,将细胞悬液接种到 250px 培养皿中,补加 5ml 培养液
7. 混匀,十字法或者 8 字法
8. 将混好的细胞放入培养箱中培养
1. 上述操作方案的数据可作为参考,实际操作已实验室配备的耗材为准,
2. 冻存时含 10%DMSO,事先加 9ml 培养液是为了稀释 DMSO,理论上 1%DMSO
对细胞性
3. 隔着 PE 手套能有效防止水浴过程中导致污染
4. 重悬的体积只是作为参考,具体的根据需要可进行调整
5. 由于复苏过程中已经离心,第二天可根据实际情况选择换液或者不换液(主要针对贴壁细胞)
1)复苏细胞:将含有 1mL鼻咽癌细胞系。悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 250px 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 收到鼻咽癌细胞系。后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现 象发生请及 时和我们联系。
2. 仔细阅读鼻咽癌细胞系。说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题,责任由客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常, 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活 力,请拍下 照片及时和我们联系,信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4.静置细胞贴壁后,请将细胞瓶内的培养基倒出,留 6~8mL 维持细胞正常培养,待细 胞汇 合度80%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。
6.建议客户收到鼻咽癌细胞系。后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和 志伟技术 部 沟通交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联 系,告知细胞的具体情况,以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。
2023年4月10-14日,“中国细胞生物学学会第十八次会员代表大会暨2023年全国学术大会•苏州”在江苏省苏州市国际博览中心举办。本次会议邀请众多细胞生物学专家,紧密围绕细胞生物学及其相关领域基础研......
2023年4月10-14日,“中国细胞生物学学会第十八次会员代表大会暨2023年全国学术大会•苏州”在江苏省苏州市国际博览中心举办。本次会议邀请众多细胞生物学专家,紧密围绕细胞生物学及其相关领域基础研......
过继性细胞疗法(ACT)已成为一种很有前途的免疫疗法,其利用从患者自己的肿瘤内收集的免疫细胞,帮助治疗晚期黑色素瘤。美国和加拿大科学家在最新一期《自然·生物医学工程》杂志上刊发论文称,他们首次发现,可......
过继性T细胞转移(ACT)是肿瘤治疗中最有前途的免疫治疗方法之一。目前有四种成熟的ACT技术,包括自体肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)治疗、抗原特异性内源性T细胞治疗(ETC)、T细胞受体工程T细胞治疗(T......
以“细胞基因治疗与再生医学产业发展”为主题的2023年第2期(总第12期)中国药谷院士专家大讲堂日前举办。业内专家普遍认为,近年来,在技术、政策、市场等驱动下,作为一种新兴的治疗方式,细胞与基因治疗成......
近期,艾瑞利 ®(阿得贝利单抗)肺癌领域适应症上市会在上海举行。来自全国各地的肺癌领域知名专家、顶级大咖、学者共赴上海,共同见证了中国首个治疗广泛期小细胞肺癌的PD-L1抑制剂成功上市的荣耀......
2017年8月,首款CAR-T细胞疗法Kymriah获得FDA批准上市。目前,FDA共批准了5款CAR-T细胞疗法上市,国内也批准了2款。CAR-T细胞疗法在治疗恶性血液病方面取得了令人瞩目的成功,然......
2017年8月,首款CAR-T细胞疗法Kymriah获得FDA批准上市。目前,FDA共批准了5款CAR-T细胞疗法上市,国内也批准了2款。CAR-T细胞疗法在治疗恶性血液病方面取得了令人瞩目的成功,然......
小非编码RNA(sncRNA),包括miRNA、tsRNA、rsRNA和ysRNA,是重要的调节分子。急性髓细胞白血病(AML)具有异质性,并涉及多种非编码RNA改变。近年来,miRNA在AML中的作......
肌肉退化是行动能力下降的标志。肌肉变性的特征是萎缩、脂肪浸润、纤维化和再生受损,这些都受到多种细胞机制的共同调节,其中泛素-蛋白酶体系统发挥着重要作用。肌肉被发现以泛素积累为特征,这伴随着几种DUB的......