说出你的故事——高效液相色谱仪发展史

高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系 统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)  内， 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数， 在两相中做相对运动时，  经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程， 各组分在移动速度上产生较大的差别，  被分离成单个组分依次从柱内流出， 通过检测器时，  样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

　　是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。

　　高效液相色谱是 目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流 动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效 液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛，几乎遍及定量定性分析的各个领域。

　　使用高效液相色谱时， 液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信 号，最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经 典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。

　　高效液相色谱仪发 展历史编辑1960年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性，为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引入经典液 相色谱。1960年代末科克兰(Kirkland)、哈伯、荷瓦斯(Horvath)、莆黑斯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱仪，开启了高 效液相色谱的时代。高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱，提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工 作得以在几个小时甚至几十分钟内完成。

　　1971年科克兰等人出版了《液相色谱的现代实践》一书，标志着高效液相色谱法   (HPLC)正式建立。在此后的时间里，高效液相色谱成为最为常用的分离和检测手段，在有机化学、生物化学、医学、药物开发与检测、化工、食品科学、环境 监测、商检和法检等方面都有广泛的应用。高效液相色谱同时还极大的刺激了固定相材料、检测技术、数据处理技术以及色谱理论的发展。

　　1960年代前，使用的填充粒大于100μm，提高柱效面临着困境，后来的研究人员便采用微粒固定相来突破着一瓶颈。

　　高效液相色谱仪色谱特点编辑高压——压力可达150～300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75  kg/cm2以上。

　　高速——流速为0.1～10.0 mL/min。

　　高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。

　　高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。

　　HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：

　　速度快——通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。

　　分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。

　　灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。

　　色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。

　　样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。