RNAi技术

DNA芯片检测siRNA专一性 长片断的双链RNA (dsRNA) 导入例如植物,真菌,果蝇,线虫等生物的细胞中会引发同源mRNA的降解——这就是所谓的RNA interference (RNAi)。RNAi分两个步骤,首先是长片断双链dsRNAs被核酶Dicer切割成21—25个碱基的small interfering RNAs (siRNAs)。这些siRNA随后和相关蛋白组合成为RNA-induced silencing complex (RISC) ,这个复合物以同源mRNA为靶摧毁mRNA。两年前Elbashir and Tuschl用siRNA在哺乳动物细胞中成功引发特异基因的沉默,从此siRNA广泛应用于这个领域。 siRNA介导的基因沉默通常要求高度的序列专一。Tuschl......阅读全文

RNAi技术

 DNA芯片检测siRNA专一性  长片断的双链RNA  (dsRNA) 导入例如植物,真菌,果蝇,线虫等生物的细胞中会引发同源mRNA的降解——这就是所谓的RNA interference  (RNAi)。RNAi分两个步骤,首先是长片断双链dsRNAs被核酶Dicer切割成21—25个碱基的sm

RNAi技术的应用

5 RNAi技术的应用5.1 功能基因组和遗传学应用随着各种模式生物和人类基因组测序的完成,基因功能的研究远远落后于大量序列所提供的信息,研究和发现基因功能成为越来越紧迫的任务。长期以来,破坏基因结构或抑制基因表达是研究基因功能的重要方法,如常用的基因敲除技术( gene knock out) 。基

RNAi技术的应用特点

由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,(长度超过三十的dsRNA会引起干扰素毒性)所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。

RNAi技术研究进展

  RNA干扰(RNA interference,RNAi)是多种生物体内由双链RNA(doublestranded RNA,dsRNA)介导同源mRNA 降解的现象。RNAi现象先后在不同生物中被发现,植物学家称它为共抑制(co-suppression)或转录后基因沉默(post transcri

RNAi技术研究进展

  RNA干扰(RNA interference,RNAi)是多种生物体内由双链RNA(doublestranded RNA,dsRNA)介导同源mRNA 降解的现象。RNAi现象先后在不同生物中被发现,植物学家称它为共抑制(co-suppression)或转录后基因沉默(post transcri

RNAi技术研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是多种生物体内由双链RNA(doublestranded RNA,dsRNA)介导同源mRNA 降解的现象。RNAi现象先后在不同生物中被发现,植物学家称它为共抑制(co-suppression)或转录后基因沉默(post tran

RNA干扰技术(RNA-interference,RNAi)

1995年,康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫(C. elegans)中的par-1基因时,发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达,而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA(sense RNA)以期观察到基因表达的增强。但得到的结果

使用RNAi技术治疗肿瘤病

肿瘤病的治疗肿瘤是多个基因相互作用的基因网络调控的结果,传统技术诱发的单一癌基因的阻断不可能完全抑制或逆转肿瘤的生长,而RNAi可以利用同一基因家族的多个基因具有一段同源性很高的保守序列这一特性,设计针对这一区段序列的dsRNA分子,只注射一种dsRNA即可以产生多个基因同时剔除的表现,也可以同时注

核糖核酸干扰技术(RNAi技术)介绍

转录后基因沉默(PTGS, post- transcriptional gene silencing)-最初被认为仅限于矮牵牛花和其它一些植物中的奇异现象,是目前分子生物学研究中一个最热门的话题。过去几年中,科研工作者已明确转录后基因沉默现象普遍存在于动、植物中,在机体防御病毒入侵和转座子沉默效应中

RNAi技术专有名词(1)

1.RNAi:(RNA interference)RNA干扰 一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNA interference,RNAi,也译作RNA干预或者干涉)。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机

RNAi技术专有名词(2)

21.Homologous Chromosome:同源染色体一对染色体,分别来自父本和母本,染色体上有着相同的线性基因序列。 22.Recombinant Clone:重组克隆将不同来源的DNA片段合成在一个DNA分子中,这种技术称为重组,得到的分子为重组克隆。 23.Ribonucleic

反义技术——RNA干扰(RNA-interference,RNAi)

最近由于RNA干扰(RNA interference,RNAi)的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的(1),是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在RNAi领域取得的进步,已经有许多这方面的综述发表(2-4)。RNA干扰是由长的双链 RNA

RNAi

1995年,康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫(C. elegans)中的par-1基因时,发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达,而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA(sense RNA)以期观察到基因表达的增强。但得到的结果是二者都同样

RNAi干扰技术及应用进展研究(一)

RNAi是Napoli CD等在试图向紫色矮牵牛花转导色素合成基因,用以增加其花色时发现的。结果出乎预料,转基因的植株不仅没有新基因的表达,反而自身的色素合成也减弱了,一些转基因的花出现了全白色或部分白色。他们把这种导入的基因未表达和植物本身合成色素基因的失活现象命名为共抑制(cosuppressi

RNAi干扰技术及应用进展研究(四)

3.5 转基因研究在动植物的转基因试验中, 经常发生基因沉默。因此, 对转基因沉默机制的探索可以为在转基因研究中避免基因沉默提供对策。在转基因植物研究中避免基因沉默可提高试验成功率,且节省时间,而在大型动物转基因研究中避免基因沉默可节约成本,提高产率。 3.6 干细胞研究在干细胞研究方面,在dsRN

RNAi干扰技术及应用进展研究(三)

3.2 基因治疗及药物筛选探索由于RNAi是针对转录后阶段的基因沉默,相对于传统基因治疗对基因水平上的敲除,整个流程设计更简便,且作用迅速,效果明显,为基因治疗开辟了新的途径。 其总体思路是通过加强关键基因的RNAi机制,控制疾病中出现异常的蛋白合成进程或外源致病核酸的复制及表达。尤其针对引起一

RNAi干扰技术及应用进展研究(二)

1.2 RNAi的作用特点 (1)“共抑制”性。RNAi是双链RNA介导的转录后基因沉默机制,它的启动子相当活跃,外源基因可以转录,但不能正常积累mRNA;RNAi作用不仅使外源基因在转录后水平上失活,同时诱导与其同源的内源基因沉默。 (2) 高效性。试验证明双链RNA干扰mRNA 翻译的效率比

哺乳动物RNAi技术-Mammalian-RNA-Interference

Mammalian RNA InterferenceThomas TuschlLaboratory for RNA Molecular BiologyThe Rockefeller University, New York Excerpted from RNAi: A Guide To Gene S

RNAi技术突破:siRNA体内传递机制

小RNAs如何进入哺乳动物细胞? 一切开始于花:上个世纪90年代挪威的研究人员发现在矮牵牛(petunias)中有一种特殊的基因的额外拷贝可以抑制其活性,而不是如之前假想的增强其活性。几年之后这种基因研究发现其机制基于细胞中mRNA的降解,最终在90年代末期诺贝尔获得者Andrew Fire和C

RNAi-protocol

 siRNA protocolsOur current strategy with siRNA is to synthesis relatively small amounts enzymatically and use these to test for efficiency by western

RNAi总结

RNA干涉(RNAi)是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象,是在线虫中发现的,在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。过去几年中,科研工作者已明确转录后基因沉默现象普遍存在于动、植物中,在机体防御病毒入侵和转座子沉默效应中起着重要作用。近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义

最新RNAi技术可媲美转基因小鼠模型

  基因编辑技术一直都是生命科学的热门研究领域,近来编辑领域出现了可与转基因小鼠技术相媲美的新RNAi干扰技术,该技术由洛克菲勒大学的研究人员研制出,在全基因组水平上首次对小鼠进行RNAi筛查研究,并在数月内发现了导致表皮肿瘤生长的基因,研究成果发表在《自然》期刊上。   RNAi技术筛查致病基因

使用RNAi技术治疗遗传性疾病

遗传性疾病的治疗美国西北大学的Carthew R W和日本基因研究所的Ishizuka A等人发现RNAi同脆性X染色体综合征(与FMR-1基因异常有关的导致智力低下的染色体病)之间的关系密切,揭示了与RNAi相关机制的缺陷可能导致人类疾病的病理机制。遗传性疾病的RNAi治疗成为当今研究RNAi的又

RNAi的实验原理和操作实用技术

  几十年来生物学上最重要的进展,也许是关于RNA分子能调节基因表达的发现。RNA干涉(RNAi)是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象,是在线虫中发现的,在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。    此后,科学家们明白,RNAi还有其他形式,它既是一种了解基因功能的强大工具,又是很多生

哺乳动物RNAi技术全面实验方法

WHENVIRUSESINFECTEUKARYOTICCELLSdomly integrate into host genomes, double-stranded RNA (dsRNA) is frequently produced from the invading genes, either

沉默是金:-强大的RNAi筛选技术

  在过去,想要发现哺乳动物细胞的重要生理过程,通常需要通过化学突变或将转座子插入到基因组中对细胞内的基因进行干扰。但是,大约10年前,RNA 干扰(RNAi)技术的出现改变了这种状态。这项技术的核心是,设计一个短链RNA,使其在转录过程中与目的基因序列互补结合,从而阻止目的基因翻译成蛋白。RN

哺乳动物细胞的RNAi技术策略(2)

1.化学合成尽管化学合成是最贵的方法,但是却是最方便的――研究人员几乎不需要做什么工作。包括Ambion和Qiagen公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成si 。主要的缺点包括价格高,定制周期长,特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高,为一个基因合成3―4对si s 的成本就更高了,

RNAi的实验原理和操作实用技术(2)

2.体外转录以DNA Oligo为模版,通过体外转录合成siRNAs,成本相对化学合成法而言比较低,而且能够比化学合成法更快的得到siRNAs。不足之处是实验的规模受到限制,虽然一次体外转录合成能提供足够做数百次转染的siRNAs,但是反应规模和量始终有一定的限制。而且和化学合成相比,还是需要占

RNAi的实验原理和操作实用技术(1)

几十年来生物学上最重要的进展,也许是关于RNA分子能调节基因表达的发现。RNA干涉(RNAi)是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象,是在线虫中发现的,在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。此后,科学家们明白,RNAi还有其他形式,它既是一种了解基因功能的强大工具,又是很多生物的基因组所

RNAi的实验原理和操作实用技术(3)

3.DEAE-葡聚糖和polybrene带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的DNA分子使得DNA可以结合在细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。两种试剂都已成功用于转染。DEAE-葡聚糖仅限于瞬时转染。4.机械法转染技术也包括使用机械的方法,