2DPAGE：DIGE荧光差异蛋白表达分析

Ettan DIGE荧光差异蛋白表达分析系统在传统双向电泳技术的基础上，结合了多重荧光分析的方法，在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记（Cy2，Cy3，Cy5）的样品，并第一次引入了内标的概念，极大地提高了结果的准确性，可靠性和重复性。在DIGE技术中，每个蛋白点都有它自己的内标，并且软件全自动根据每个蛋白点的内标对其表达量进行校准，保证所检测到的蛋白丰度变化是真实的。DIGE技术可检测到样品间小于10%的蛋白表达差异，统计学可信度达到95%以上。利用Ettan DIGE技术还可以对微量（少到5μg）样本进行蛋白质组学分析。   原理：   在Biomedical Node of the Australian Proteome Analysis Facility的网站中有关于DIGE原理的动画。如有兴趣，可以从以下链接浏览http://www.proteomics.usyd.edu.au/movies/dige.swf      DIGE的工作流程如下：

优点： 1、相对于2D，在检测大量样品时，由于不同样品可以跑同一块胶，大大减轻了工作量。 2、检测灵敏度更高  Detection Limit = 125 pg protein，大大节约了样品，特别是不易得到的珍贵样品。 3、检测动态范围更大—Dynamic range 104 -105， 4、内标归一化 —— 采用内标而消除了胶与胶之间的差异造成的误差 5、统计学分析—— 利用DeCyder软件可以得到统计学可信的结果，极大降低操作者之间的偏差，并且将手工操作时间减少到几分钟。   仪器： 1st dimension: IEF: IPG-PhorII (GE) and Protean IEF (BioRad) 2nd dimension: GE Ruby SE600 (16x16cm) GE Ettan DALTsix (26x20cm) BioRad Criterion pre-cast (13x9cm) BioRad Protean (8.6x7cm) Data acquisition: GE Typhoon 9400 Scanner Analysis software: GE DeCyder for DIGE gels