SMMC7721肝癌细胞67kD层粘连蛋白受体的分离纯化

摘要　分离纯化肝癌细胞的67 kD 层粘连蛋白受体(67LR) ,以便进一步研究67LR 的结构、功能及其在肝癌浸润、转移过程中的作用. 以SMMC-7721 肝癌细胞和L202 正常肝细胞为材料,采用131 I 标记的层粘连蛋白测定其与细胞的结合能力;亲和层析法分离纯化层粘连蛋白受体,用SDS2PAGE、放射自显影及体外竞争结合实验进行鉴定. 在相同条件下SMMC-7721 肝癌细胞与层粘连蛋白特异结合量为17154 ±0149 ngP105 细胞,而L202 正常肝细胞与层粘连蛋白的特异结合量为8136 ±0148 ngP105 细胞. 经过亲和层析,从SMMC-7721 肝癌细胞和L202 正常肝细胞均可获得纯化受体,SDS2PAGE显示为单一条带,分子量为67 kD ,放射自显影及体外竞争结合实验表明其具有较强的与层粘连蛋白结合的活性. 体外竞争结合实验表明,SMMC27721 肝癌细胞层粘连蛋白受体(7721LnR) 的抑制率可达到96127 ±2129 % ,而L202 正常肝细胞层粘连蛋白受体(L202LnR) 的抑制率为48171 ±3179 % ,这说明7721LnR 与层粘连蛋白的亲和力明显高于L202LnR( P < 01001) . 结果表明,与L202 肝细胞比较,SMMC27721 肝癌细胞具有与层粘连蛋白较强结合能力的特异受体,并从肝癌细胞膜上分离纯化到与层粘连蛋白有较强亲和力的67LR.