ATCC细胞分类检测步骤

ATCC细胞检测步骤：

【 样本储存 】：收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70℃可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。

【试剂盒成分】：人、绵羊、小鼠、大鼠、猪、兔、山羊、牛、马、猪；植物细胞因子、骨代谢、细胞凋亡、激素内分泌、活性多肽、肝纤维化、自身抗体科研Elisa检测试剂盒。 主要用于科研方面，不用于临床诊断。可以用于检测各种指标。

ATCC细胞操作方法：

（1）取成年新西兰大白兔，耳缘静脉注射空气处死后，取下兔子的双腿，立即用75%乙醇浸泡。

（2）移入细胞房内，去除双腿表面的皮毛及肌肉，剪取关节段，移至超菌工作台内。

（3）PBS洗涤数次，用手术刀或弯剪将关节表面的软骨组织取下。

（4）软骨组织块静置5min，弃去上层液体及悬浮组织，将软骨组织剪成1mm3的大小。移到离心管中加3倍体积的0.25%胰蛋白酶，置入37℃的恒温摇床中，振荡消化15-20min；

（5） 4℃静置5min；弃上清，PBS洗涤，去上清。加入0.2%胶原酶II，置入37℃的恒温摇床中，振荡消化2H；
（6）加入生长培养基终止消化，反复吹打后依次通过200目滤网。收集滤液,1200rpm离心8min，弃上清，用DMEM完全培养基重新悬浮细胞, 放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

（7）细胞传代后放入预置有薄骨片或盖玻片的培养板中进行培养。细胞完全展开后即可固定做原代鉴定。