Alexa Fluor 探针之间的光谱叠加程度会随着探针发射峰之间的距离增加而下降,如 Figure2(b)所示。在这种情况下, Alexa Fluor 488 和深红色染料 Alexa Fluor 633 与 Figure2 (a)比较,重叠区域明显降低。这两种染料人眼都很容易区分,光谱重叠程度低在共定位实验中可使串色最小化,如每个探针的浓度相似的话,应该可以产生较好的结果(注意:深红色的荧光染料 Alexa Fluor 633 在低浓度时通过显微镜目镜很难观察到)。 Alexa Fluor 633 可被红色氦氖激光器的 633nm 线最有效的激发,也可被黄色氦氖激光器的 594nm 激发。或许,在 Alexa Fluor染料发射的可见光区域,最好的光谱分离是 Alexa Fluor 488和 Alexa Fluor 647 的结合(图中未显示)。实际上,在这些染料之间没有光谱重叠,即使样品含有过量的 Alexa Fluor 488,应该也没有串色。具有这些特点的荧光探针是共聚焦显微镜分析共定位的理想选择。
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