流式细胞仪的工作原理是:将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中,在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出,形成细胞柱。
流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束,垂直照射在样品流上,被荧光染色的细胞在激光束的照射下,产生散射光和激发荧光。
这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测,这种信号基本上反映了细胞体积的大小;荧光信号的接受方向与激光束垂直,经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离,形成多个不同波长的荧光信号。
这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度,经光电倍增管接收后可转换为电信号,再通过模/数转换器,将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。
计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理,将分析结果显示在计算机屏幕上,也可以打印出来,还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。
检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达,其X轴为测量强度,Y轴为细胞数目。
一般来说,流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数,这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据,既可以单独显示每个参数的直方图,也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。
细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体,充电后振动,使喷出的液流断裂为均匀的液滴,待测定细胞就分散在这些液滴之中。
将这些液滴充以正负不同的电荷,当液滴流经带有几千伏特的偏转板时,在高压电场的作用下偏转,落入各自的收集容器中,不予充电的液滴落入中间的废液容器,从而实现细胞的分离。对分选出的细胞可以进行培养或其它处理,做更深的研究。
美国BD C6型流式细胞仪
首先C6流式细胞仪能避免操作新手的一个容易犯的错误——调整电压,同步化不同的细胞。C6流式细胞仪采用的是低压流动系统(蠕动泵)而不是真空泵,因此可以控制样本进样速度和活性区流的直径,这就能为样本选择的活性流区的大小。
C6的探测器不但可灵敏的捕获前散射光和旁散射光,还有四个可调光学滤光片的荧光探测器。可以实时收集1600万个通道的数据,宽的动态范围消除了对探测器进行补偿的必要性,当使用Cflow软件的Zoom function模式观察一个特定通道时,其他数据仍然被监测并且记录到数据文件。
美国BD C6型流式细胞仪安装和维护简单。系统拥有自动除污和清洗流路程序。当关闭主机时,自动化系统会自动用清洗液清洗流路系统,然后再使之充满鞘液。鞘液会保持在流路系统中,直到下次开机。在使用过程中,如果需要启动清洗流程,那么点击一下鼠标就可。
由于C6流式细胞仪不使用加压流动系统,可容纳多种类型的管子,包括任何品牌的12×75mm管和微型的离心管(无盖)。
C6流式细胞仪系统设计小巧灵便(17.3寸宽x16.3寸深),可在任何实验室配备。重量不到30磅,可方便移动,这是其他同种产品所不能达到的。
C6对电源电源(110V-240V、50-60HZ)没有特殊要求,不需要增加任何电源控制设备。
如果样品比较多,可选配自动进样装置。
Cflow操作分析系统,能简单快速的搜集分析数据,具有优良人机界面,研究人员经过半个小时的培训,就可以灵活、准确的使用C6流式细胞仪系统。
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