扩增效率低：反应条件不够优化。设计更好的引物或探针；改用三步法进行反应；适当降低退火温度；增加镁离子浓度等。
PCR 各种反应成分的降解或加样量的不足。
PCR 产物太长： 一般采用 80～150 bp 的产物长度。
