DNA印迹杂交分析实验——放射标记法

本方案适合于用100~1 000 bp 长的放射性标记的DNA探针对Southern转印、斑点及狭线印迹进行杂交分析。

DNA

SDSSSC

水浴锅培养箱

1.  用6×SSC润湿带有固定了的DNA的膜。

2.  将膜的DNA面朝上置于杂交管中，ATP溶液的加入量为约1 ml/cm² 膜，在68℃杂交炉中滚动3 h。

3.  在预杂交即将结束时，于100℃将DNA探针变性10 min，置于冰中。

4.  将杂交管中的APH溶液倒掉，换上等体积的预热的APH溶液（68℃），加入变性探针，68℃滚动下杂交过夜。

5.  倒掉APH液，加入等体积的2×SSC/0.1%SDS，室温下滚动温育10 min。5 min后更换洗膜液。

6.  用等体枳的0.2×SSC/0.1%SDS替换上述洗膜液，室温下滚动温育10 min 后更换洗膜液

7.  如果需要，在42℃，0.2×SSC/0.1%SDS进行15 min 中等严紧度的洗膜2次。

8.  如果需要，在68℃，0.1×SSC/0.1%SDS进行15 min 高等严紧度的洗膜2次。

9.  倒掉最后的洗膜液，在室温下用2×SSC漂洗膜，并吸干多余的液体，用塑料膜包裹后放射自显影。