DNA探针的标记实验

DNA

EGFR-PCR产物 washing buffer Detection buffer TE buffe

eppendorf管 Tip头 PCR仪 镊子 无粉手套 量加样器

1.  灭菌去离子水稀释1 ug DNA至总体积16 ul。

2.  DNA热变性：DNA样品于PCR仪中100℃变性10 min，后迅速置于碎冰中3 min 以上。

3.  加4 ul DIG-Random Labeling Mix，混匀后离心2000 rpm×5 min（4℃）。

4.  PCR仪37℃反应过夜。

5.  加2 ul EDTA终止反应，标记结束。标记物-20℃保存>1年
 

1.  用于标记的DNA模板尽可能纯化，以提高标记效率

2.  模板DNA>100 bp。

3.  经DIG标记的探针不能用酚/氯仿抽提纯化

4.  根据说明书确定标记效率（标记探针及试剂盒阳性对照DIG标记DNA梯度稀释，尼龙膜点样，样本变性，封闭，杂交，现色定量）。

5.  本法亦可用于单链DNA或RNA探针的标记，当标记RNA探针时，需采用逆转录酶，收获产物为标记的单链cDNA。

6.  可根据下表标记产物。