A260/280比值较低?或者A260/280比值较高?
参考见解:用水作为洗脱液比较偏低,或者蛋白质残留,但如果操作过程中使用了苯酚,则更可能是苯酚残留。而比较高可能是大量RNA残留,没有使用RNaseA,或RNaseA活性下降。A260 值提示的含量与电泳检测时提示的含量有可见的误差则为苯酚残留。
DNA影响后续酶反应试验?
参考见解:
1、 在洗脱液中有残留的漂洗液GW,可通过再次的离心去除硅胶膜上的GW。
2、 大量RNA残留。
在缓冲液GA GB 中有白色沉淀?
参考见解:白色沉淀可能使由于低温或长时间放置产生,可在使用前在56℃重新加热融解。
在操作中加入缓冲液GB有白色沉淀?
参考见解:在缓冲液GB加入后产生的白色沉淀在70℃温浴时会消失,不会影响下游的操作。
CTAB法提取DNA,CTAB为什么要预热?
参考见解:
1、 CTAB溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出,因此在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃。
2、 促进CTAB更好的溶解,以提高其释放植物组织中DNA的效率,先达到了反应温度,这样实际作用时间要比不预热短一些。
在用CTAB法提取玉米嫩叶DNA,所取到的DNA为什么是黄色或黑色而不是呈白色?
参考见解:
1、 可能是色素的问题,不同的材料会出现不同的颜色,用这些应当可以P出来东西。
2、 你取样的时候带上了别的东西 ,或者洗涤的时候没有洗干净。
CTAB法抽提DNA,95%的乙醇沉淀后,用1/10体积3mol/L的NaAc(pH5.2)和1体积的76%的乙醇洗涤后,自然晾干后加65度的TE(pH8.0),TE的量并不少,可总是溶的不好,什么原因?
参考见解:不能溶解不要紧,离心机大力离心后取上清,加入无水乙醇沉淀后在用TE重悬,提取的DNA要纯些。也可以吸取溶解了的TE液加入异丙醇再次沉淀。
用CTAB法抽提的,CTAB和DTT(二硫苏糖醇)混合后加入磨碎的叶子中,65度30分,后用氯仿/异戊醇去蛋白,吸上清加异丙醇,但没有看见DNA,叶子的量很多,取的是四叶期最老的叶子。为什么?
参考见解:老叶子破壁困难,DNA难以释放出来。
1、 尽量磨细叶片,最好用液氮反复几次研磨为粉末状;
2、 延长CTAB的作用时间,期间不时摇匀。
也可能由于叶子量太大,而CTAB量少,导致得到的液体粘稠,无法混匀,细胞破裂不完全,DNA少;可试着用大的离心管,多加入CTAB,65度温浴并不时地摇匀。
抽提过程中的现象及可能的原因?
参考见解:
1、 核酸不溶解或者难溶解 – 蛋白质残留 (虽然目前更多的资料强调的是过分干燥所致。)。75% 乙醇洗涤后,如果是空气干燥,几乎不可能过分干燥的,尤其是在南方潮湿的地方。佐证实验:撕取少量 Merck 的丝状CT DNA 到一个离心管中,加入无水乙醇;10 分钟后彻底去除乙醇;待乙醇完全挥发后,加入 TE,10 分钟后溶液就非常均匀而粘稠了。
2、 使用异丙醇沉淀核酸,沉淀为白色 – 多糖残留。
3、 核酸溶解后为乳白色 – 多糖残留。