DNA斑点和狭线印迹实验

DNA

SSC NaCl NaOH Tris·Cl

紫外透射仪 电泳仪 多样抽滤加样器

1.  裁一张与多样过滤加样器一样大小的尼龙膜，将膜置于6xSSC的表面让其自然浸没。放置10 min。

2.  裁一张与多样过滤加样器一样大小的Whatman 3 MM 滤纸，用6xSSC浸湿。

3.  将Whatman 3 MM 滤纸置于多样抽滤加样器上，将膜放置于其上。将多样抽滤加样器按厂商说明书安装好，确保装置中不漏气。

4.  在DNA中加入20xSSC使其终浓度为6×SSC，体积为200~400 ul，在100℃变性10 min，然后置于冰中。

5.  连接吸液装置与多样抽滤加样器，每孔中加入500 ul 6xSSC。

6.  将DNA样品离心5 s，将样品加于各孔中，小心勿让吸头触及膜，让样品滤过。

7.  拆开多样过滤加样器装置，将膜置于一张浸过变性液的Whatman 3 MM 滤纸上，放置10 min。

8.  将膜转至一张浸过中和液的的Whatman 3 MM 滤纸上。放置5 min。

9.  将膜置于一张Whatman 3 MM 滤纸上，晾干。

10.  将尼龙膜置于可透过紫外线的塑料夹层中，将有DNA的一面朝下置于紫外透射仪上照射适当的时间以固定DNA。

11.  将晾干的膜夹于Whatman 3 MM 滤纸之间，室温下可保存数月。

在膜上阳性反应呈带状。实验中应注意以下问题：转膜必需充分，要保证DNA已转到膜上。杂交条件及漂洗是保证阳性结果和背景反差对比好的关键。洗膜不充分会导致背景太深，洗膜过度又可能导致假阴性。若用到有毒物质，必需注意环保及安全。

主要应用

1.遗传病诊断

2.DNA图谱分析

3.检测样品中的DNA及其含量

4.PCR产物分析