DNA连接酶的缺点

无3’→5’阅读校正功能，在PCR扩增过程可引起错配，30次循环错配率约0.25%。

措施：选择高保真Taq酶，如Pfu。

原因：Pfu具有3’→5’外切酶活性。

注意：Pfu扩增产物为平末端。