E玫瑰花环形成实验

肝素抗凝人外周血

淋巴细胞分层液SRBC悬液Hank's液NBS

血球计数板尖吸管载玻片瑞氏染液

1.  取肝素抗凝血1 ml 加1 ml Hank's 液，混匀后用尖吸管将其加在2 ml分层液上。
 

2.  离心2000 rpm，30 分钟，用尖吸管吸取血浆与分层液界面处富含淋巴细胞的悬液置于另一洁净试管中。
 

3.  用Hank's 液以1000 rpm，离心10 分冲洗细胞两次，末次弃上清后再加入Hank's液1 ml，混匀，用微量加样器吸取0.02 ml 加于0.38 ml 白细胞计数液中，在血球计数板上于低倍镜下计数，并根据下式算出每毫升细胞数。然后用Hank's液配制成10⁷ /ml细胞悬液。

4.  取10⁷ /ml细胞悬液0.1 ml加0.1 ml经SRBC吸收的灭活NBS，再加0.2 ml0.5 %SRBC悬液，混匀，放37 ℃温箱5 分钟，低速离心500 rpm，5 分钟，然后放4 ℃冰箱2 小时或过夜。
 

5.  取出试管，轻轻使沉淀的细胞悬浮，用尖吸管取出一滴置于载玻片上，盖上已滴加瑞氏染液的盖玻片，于高倍镜下观察计数。

1.  SRBC 自绵羊体内取出后限在2 周内使用。

一、实验结果
 

计数 200 个淋巴细胞，凡结合3 个SRBC 以上者为E 玫瑰花阳性细胞，求出百分率即为T 细胞百分比。正常值为68±9.9%。