ELISA之洗板技巧——全自动酶免工作站、洗板机

　　洗板是ELISA试验中用到最多的一个步骤，因此优化ELISA的重点之一在于洗板。洗板是为了分离未结合的游离物质，只保留已结合在微孔板上的固相物质，以供最终检测。本文将为您介绍BIOBASE全自动酶免工作站和洗板机洗板的技巧。

　　全自动洗板过程最重要的是洗涤参数的设置，大部分的参数都会对结果造成直接影响，因此我们从以下几个重要参数进行分析和探讨。

　　1、注液量

　　如果你的实验结果出现较多的假阳性，如果你怀疑这是洗板未洗干净造成的，那么你需要将注液量调大，最好是注满整个孔。注液量太少洗不到微孔较高的位置，而这些位置可能也有残留的待检测物质，从而使最终结果出现假阳性。ELISA微孔板的厂家一般会在试剂盒的说明书中写明包被量，行业中通常使用的包被量是200µl，这种情况一般建议使用300 µl注液量进行洗涤。一般来说，注液量越大，则残留的抗体或抗原量就越少。增大注液量最直接的方法是注入过量的洗涤液，通常96孔板的每个孔能容纳330至460µl。BIOBASE全自动酶免工作站和洗板机可设置远远超出这个量的注液量，因为洗板头结构设计了防溢流功能，就是在分液的同时打开吸液功能，将多余的洗涤液吸走，这样既增加了注液量又不会溢出孔外污染其他孔。

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　　2、洗板次数和洗板强度

　　第二个影响洗涤效果的主要参数是洗板次数和洗板强度。当然，洗板次数越多，洗板强度越大，残留量也就越低。但是洗板次数过多或洗板强度过大可能会破坏已包被的固相载体，反而使检测结果不准确。通常ELISA微孔板的厂家会在说明书中注明建议的洗板次数。BIOBASE全自动酶免工作站和洗板机可根据实际情况自由设置洗板强度，通常默认为中等强度洗5次，这是符合大多数试剂的参数。但是，有时候也会遇到一些特殊情况的试剂，比如游离的物质吸附性较强，较难洗净，这时就需要增大洗板强度或洗板次数；或者恰恰相反，参与结合的固相载体不是特别牢固，容易被冲洗掉，这时就需要减弱洗板强度或减少洗板次数。

　　3、吸液高度和吸液位置

　　最后一个影响洗板效果的参数就是吸液高度和吸液位置，吸液高度会明显影响残留量，如果吸头与反应孔底部的距离稍大，那就会让残留量急剧增加。反之，如果吸头压着反应孔底部，液体比较难进入吸头，那么也会使吸液效率降低，残留量增加。

　　大多数洗板机会使用浮动的洗板头，这种洗板头有一定的自由调节空间，不需要根据不同的微孔板设置不同的吸液高度，而是直接下降到微孔底部进行吸液。BIOBASE全自动酶免工作站和洗板机均采用这种洗板头，下降到微孔底部，接触后会自然顶起一部分，这样就使得吸液针紧贴底部进行吸液，同时吸液针端面开有豁口，不会妨碍吸液效率。

　　吸液的位置也对残留量有着重要影响。如果每个孔只使用一个抽吸点，也就是一点吸液（这很常见，因为更快），那么吸液的位置是非常重要的。大部分厂家会把这个位置设置在微孔的中间位置，因为这样整个孔中的液体抽吸过程比较均匀，但是这个位置其实并不是最佳抽液位置，最佳的位置取决于洗头的形状，一般来说，在孔中心与孔壁之间的某处。因此，BIOBASE全自动酶免工作站和洗板机采用两点吸液，在孔中心和孔壁之间取前后两点进行吸液，使残留量降到最小。