Gibco血清大学问

  Gibco胎牛血清通常在细胞培养中作为基础生长培养基的添加剂。Gibco胎牛血清是从适合人类卫生习惯的农场收集的。有时，也可能用其他的牛血清，如新生牛血清或者供体牛血清。在细胞培养中，血清供应了丰富的高分子蛋白，低分子量营养物，疏水载体蛋白和其他体外细胞生长必要的成分如激素和粘附因子。同时，Gibco胎牛血清可以增加培养基的缓冲能力或中和有毒成分，起到保护细胞的作用。在细胞培养过程中是否选择添加血清，主要根据基础培养基化学成分，培养细胞的类型和培养体系而定。今天给大家分享的是Gibco胎牛血清操作步骤及血清实验中常见的问题解析！搬起小板凳快来围观吧！

    Gibco胎牛血清操作步骤：

    一、采集

    在Gibco胎牛血清生产过程中，全血使用无菌一次性塑料袋收集，待凝结后分离，收集和冷冻储存血清。控制Gibco胎牛血清的初始收集是控制zui终血清产品质量的关键因素。只有初始原料符合我们的规范时才能允许生产。

    二、血清原料

    在全球市场存在两个Gibco胎牛血清标准：美国农业部标准（USDA）和欧洲标准。美国农业部标准，原始血清必须采自未发生疯牛病（BSE）和口蹄疫（FMD）疫情的国家，才可自由进口到任何国家，用于安全生产。而且研究者只有使用符合这种标准的血清，才被允许将其细胞和细胞产品送至其他同样有严格进口条款的国家，进行合作交流。

    三、处理过程

    优选数个批次冻存血清进行解冻，检验其内毒素和血红素的含量，满足标准的Gibco胎牛血清才能在冷藏条件下充分混合继续加工，进一步进行过滤除菌。依次通过预过滤和膜过滤来处理Gibco胎牛血清。zui后的过滤步骤为连续三次用100nm的滤膜过滤。过滤结束，血清采用无菌工艺进行分装，整个过程有效确保zui终产品无菌。Gibco胎牛血清生产的空气洁净度为100级。所有分装工作台都通过微粒空气过滤器过滤，并保持正压分装环境，对总微粒、悬浮微粒数和压力进行监控。分装后，终产品迅速-20度冻存，并隔离，直到所有的质量控制检测完成。

    四、FBS质量控制

    每批Gibco胎牛血清检测确认符合各项标准，并以书面的方式记录在质检报告中。

    五、质量保证

    Gibco胎牛血清生产过程在一个严格控制的条件下进行。紫外线灭菌，过滤除菌和分装是关键生产环节，可以确保血清的品质。与血清生产相关的数据作为专门的档案记录，从初步采集的原料到成品储存的整个生产过程，以及质量控制检测和结果都有备案，并可以在监控条件下追溯源文件。Gibco胎牛血清生产过程遵循欧洲议会关于体外诊断的标准。

    血清实验中常见的问题解析：

    一、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？

    将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。

    长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。

    建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

    二、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理？

    沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清(400g，1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。

    三、 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

    一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

    四、 为什么要热灭活血清？

    加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学 研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。

    五、 有必要做热灭活吗？

    实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。

    而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物 的分裂扩增。

    非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量!

    六、细胞培养 中出现黑点是污染吗？如何处理？

    一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

    七、小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项？

    来源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

    组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。

    血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。

    解冻血清时 ，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。