HCG在放射免疫法中的测定实验原理和方法

一、原理

HCG是放射性同位素标记技术与抗原抗体免疫反应相结合的超微量分析法，是用放射性核素（如 125I/3H）标记的极微量的示踪抗原*（Ag*）/抗体*（Ab*）与待测抗原Ag/抗体Ag）一起来竞争结合有限的特异性抗体（Ab）/抗原（Ag），故称饱和分析或竞争抑制法，其反应过程为：Ag*•Ab量固定，Ag*+Ag>Ab可结合的数目（抗原过量），Ag*与Ag竞争结合 Ab，直到反应达到平衡，形成的AD*•Ab量随着Ag量改变：Ag量大，与Ab结合的机会多，Ag*•．Ab少，反之，则形成的Ag*•．Ab多。Ag 量与Ag*．Ab量之间可以竞争抑制曲线表示。

二、方法

放射免疫测定必须有3种基本试剂：

（1）能与待测物（配体）专一结合的结合试剂，通常是专一抗体受体；

（2）具有放射活性的配体标记物，常用的核素有125I及3He；

（3）能将与试剂结合的配体与未结合的配体分离的分离试剂。

在竞争性测定中，加入定量的抗体和标记配体，反应中未标记配体（待测物）与标记配体竞争结合试剂，未标记配体的量愈多，标记配体与抗体相结合的概率就愈低，从而标记配体的结合部分（B）低，经过一定时间抗体与配体的结合达到平衡状态后，可用分离试剂结合的配体（B）与未结合的配体（F）分离，用计数器计数结合部分（B）标本中的HcG量可通过比较标本B的计数与标准品的计数（标准曲线）求得。

（1）125碘一尿HCG（PEG）药盒组分包括：HCG标准管6瓶，冻干；HCG抗体（蓝色）1 瓶，冻干；125碘一HCG（红色）1瓶，冻干；正常兔血清5瓶，冻干；磷酸盐缓冲液1瓶，溶液；PEG 1瓶，溶液。曲线范围50～200Iu/L。

标准曲线：以标准浓度为横坐标，以结合率为纵坐标，绘制标准曲线，依此求得标本的HCG一β浓度。

正常参考值：<2501U/L。

保存：2～8℃。

有效期：35天。

（2）125碘一HCG（PR=免疫分离试剂）药盒组分包括：HCG标准6瓶，冻干；HCG抗体（蓝色）1瓶，冻干；125碘一HCG（红色）1瓶，冻干；NSB 1瓶，溶液；温育液l瓶，溶液；PR 1瓶，溶液。

曲线范围：25～2000Iu/L。

灵敏度：<25IU/L。

标准曲线：以标准浓度为横坐标，以结合率为纵坐标绘制标准曲线，以此求得标本的HCG一β浓度。

正常参考值：<100Iu/L。

保存：2～8℃。

有效期：35天。

（3）125碘一HCG—B（DAP=双抗+PEG）药盒组份包括：

HCG标准6瓶，冻干；HCG—B抗体（蓝色）1瓶，冻干；125碘一HCG（红色）1瓶，冻干；DA 2瓶，冻干；温育液1瓶，溶液；PEG 1瓶，溶液。

曲线范围：5～320Iu/L。

灵敏度：5IU/L。

特异性：抗HCG—B血清与LH的交叉反应率<5%。

标准曲线：以标准浓度为横坐标，以结合率为纵坐标绘制标准曲线，以此求得HCG—β浓度。

正常参考值：<20Iu/L。

保存：2～8℃。

有效期：35天