HLA分型技术（一）

  HLA分型并不只是一种应用性的临床检测指标，免疫遗传学研究的发展，很大程度上依赖于以分型为主要手段的HLA多态性分析。60年代建立的并不断完善的血清学及细胞学分型技术主要侧重于分析HLA产物特异性；80年代起建立的DNA分型方法则侧重于基因的分型。

　　一、血清学分型技术

　　（一)HLA-Ⅰ类抗原的检测

　　HLA-A、B、C抗原型别鉴定均借助微量淋巴细胞毒试验（microlymphocytotoxicitytest)或称补体依赖的细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity test)。原理为取已知HLA抗血清加入待测外周血淋巴细胞，作用后加入免补体，充分作用后加入染料，在倒置显微镜下判断结果，着染的细胞为死亡细胞，表示待检淋巴细胞表面具有已知抗血清所针对的抗原。标准抗原清取自多次经产妇或计划免疫志愿者。

　　（二)HLA-DR、DQ抗原检测

　　该二抗原分型方法同HLA-Ⅰ类抗原，但所用抗血清须经过血小板吸收以去除针对Ⅰ类抗原的抗体。另外，待测细胞须是经纯化的B细胞。医.学.全.在线.网.站.提供

　　血清学分型是一项古老的技术，虽然近年来已建立许多新的分型技术，但血清学方法目前仍是HLA分型的基础。

　　二、细胞学分型技术

　　HLA-Dw特异性与HLA-DP特异性可分别通过纯合分型细胞（homozygote typing cell,HTC)及预致敏淋巴细胞试验（primed lymphocyte test,PLT)检测。二种方法的基本原理均是判断淋巴细胞在识别非已HLA抗原决定簇后发生的增殖反应。由于分型细胞来源困难以及操作手续繁琐，细胞学分型技术下正逐渐淘汰。

　　三、HLA的DNA分型技术

　　上述传统的HLA分型方法有许多不足之处，近年来国内外已将HLA分型技术由抗原水平发展到基因水平。

　　（一)限制性片段长度多态性检测技术

　　这是首先建立的对多态性进行检测的DNA分析技术。个体间抗原特异性来自氨基酸顺序的差别，后者由编码基因的碱基顺序不同所决定。这种碱基顺序的差别造成限制性内切酶识位置及酶切位点数目的不同，从而产生数量和长度不一的DNA酶切片段。用特异性探针对整个基因组DNA酶切片段进行杂交，即可分析限制性长度片段多态性（restriction fragment length polymorphism,RFLP)。一定的内切酶组合所得到的HLA-RFLP可以和传统方法测定的HLA特异性型别相关。80年代末发展起来的PCR（polymerase chain reaction)技术已被用于RFLP分析，即用等位特异限制酶裂解PCR扩增的片段，然后再进行分析，从而大提高了灵敏度。