HSC冻存和复苏

实验概要

HSC冻存和复苏

主要试剂

HSCs培养液、FBS、冻存液B

主要设备

15 mL离心管、冻存管、镊子、离心机，超净台，体视镜，倒置显微镜，CO₂培养箱，-80℃冰箱，液氮储存柜

实验步骤

（1）细胞冻存：
① 冻存细胞时，最好提前两个小时给HSCs半定量加新鲜HSCs培养液。
② 准备冻存液并放到冰上预冷。
③ 收集细胞到15 mL离心管，轻轻的吹打细胞，尽可能使其成为单个细胞，室温2000r/min离心10 min；
④ 离心完毕轻轻地弃去上清，加上合适体积的冻存液，细胞密度最好能在2×10⁶～5×10⁶cells/mL，轻轻地吹打细胞混匀，之后500ul/管分装到冻存管中，一般来说每个冻存管内的细胞可以复苏到一个35 mm培养皿中。
⑤记录细胞名称、冻存时间、冻存代次、品系、复苏剂量、冻存人等。用分步法或者程序降温盒冻存细胞。
（2）复苏细胞
① 事先在离心管中准备好5mL （10倍于冻存液体积）HSCs培养液。
② 从液氮中取出冻存管，放到37℃水浴中，使细胞悬液迅速融化。可以用镊子来回晃动冻存管加速细胞悬液融化。
③ 把冻存的细胞加到事先准备好的HSCs培养液中中， 室温1000 r/min离心5 min。
④ 用HSC培养液悬浮细胞后接种在培养板中，具体密度可根据实验目的调整。