发布时间:2019-04-06 20:45 原文链接: IL4生物学活性检测实验

实验材料

IL-4诱生

试剂、试剂盒

生理盐水淋巴细胞分层液FCS-IMDM培养液PHA

仪器、耗材

细胞培养板培养箱

实验步骤

一、IL-4生物学活性测定

 

CT.4S细胞悬液制备①

接种细胞于96孔培养板②


加待测样品和标准品③

加3H-TdR④


收集细胞,测定3H-TdR掺入量⑤

绘制标准曲线,计算待测样品的IL-4的活性单位⑥

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注意事项

①用0.25%胰酶消化、收集生长旺盛的贴壁CT.4S细胞;经Hank’s液离心洗涤2次后,10%FCS-RPMI-1640培养液调制细胞浓度为1×105/ml。


②接种细胞于96孔细胞培养板,每孔0.1 ml。


③加入适当稀释的待测样品和标准品,每孔0.1 ml。每个样品设3个复孔,同时设培养液对照。37度,5%CO2孵育48小时。


④与⑤同IL-2。


⑥以cpm为纵坐标,对应的不同稀释浓度IL-4标准品浓度为横坐标,在半对数图纸上绘制出标准曲线,再从标准曲线上查出待测样品中的IL-4含量。


关键点在IL-4诱生过程中,常同时产生一定量的IL-2,将影响IL-4的检测结果。因此,最好采用IL-2mAb吸附剂除去IL-2。

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