LCMS技术临床应用培训班报告（二）

　　分析测试百科网讯2016年4月20日，液相色谱-质谱（LC-MS）技术临床应用培训班在上海中山医院举办。纽约州罗彻斯特大学临床质谱实验室主任兼北美华人临床化学学会（NACCCA）主席张岩教授、金域临床质谱检测中心赵蓓蓓、中国科学院生物物理研究所李岩、广州金域临床质谱检测中心主任程雅婷、复旦大学附属中山医院检验科副主任郭玮、徐汇区中心医院中心实验室副主任李水军教授和中国科学院研究生院訾金等都带来了精彩的报告。（相关链接：LC-MS技术临床应用培训班报告（一））

会议现场

中国科学院生物物理研究所 李岩

　　李岩：中国科学院生物物理研究所研究员，中国科学院引进杰出技术人才，美国马里兰大学分析化学博士，从事临床诊断新方法新技术的开发应用。

　　中国科学院生物物理研究所李岩带来了题为《LC-MS/MS的实验方法开发》的报告。李岩表示实验方法设计原则首先要确定实验目的， 检测内容要确定：组学检测还是目标分子检测？大分子还是小分子？检测要求：定性还是定量？检测通量，试剂成本等具体要求？

　　目标蛋白质的定性实验方法，目标蛋白质定性的基本实验过程：电泳分离，胶内酶解，质谱鉴定，数据分析。在目标蛋白质的定量实验方法中，李岩介绍到目标蛋白质定量方法的原理可采用质谱多反应监控技术和同位素多肽合成技术。在蛋白质组学的定量实验方法中，李岩介绍到基于质谱谱图数据的相对定量方法；同位素标记法（iTRAQ, O18、TMT等）；细胞同位素标记法（SILAC）；SWATH模式等蛋白质组学的常见定量方法。在目标代谢物的定性实验方法中，李岩介绍到准确分子量分析和标准谱图比对的代谢物定性原理。在目标代谢物的定量实验方法中，李岩介绍到质谱多反应监控技术和同位素内标定量原理。在代谢组学的定性实验方法中，李岩还谈到糖组学的定性实验方法等。

金域临床质谱检测中心 赵蓓蓓

　　赵蓓蓓：广州金域临床质谱检测中心副主任,具有丰富的临床色谱质谱检测技术经验，主导和参与本中心临床色谱质谱类新项目开发三十余项。

　　金域临床质谱检测中心赵蓓蓓带来了题为《LC-MS/MS定量检测方法建立与评估的基本要求》的报告。赵蓓蓓介绍到LC-MS/MS技术临床应用的主要诉求点，由于免疫学方法的局限性，LC-MS/MS技术在临床应用方面具有明显的优势，可用于遗传代谢病（血液氨基酸和酰基肉碱）、内分泌疾病（类固醇类激素）、营养素监测、毒理学和滥用药物监测、疼痛管理、治疗药物监测（免疫抑制剂等）、蛋白质鉴定和定量等。

　　赵蓓蓓介绍到在LC-MS/MS方法建立前，需要考虑目标物的分析；内标物的选择；设备、试剂及环境条件等准备等。LC-MS/MS定量检测方法建立需要信息及文献检索、质谱方法建立、液相色谱方法建立、样品前处理方法建立、方法建立的其他考虑-基质效应。另外，赵蓓蓓还介绍了LC-MS/MS定量检测方法验证基本要求。

纽约州罗彻斯特大学临床质谱实验室主任兼北美华人临床化学学会（NACCCA）主席 张岩

　　张岩：纽约州罗彻斯特大学临床质谱实验室主任，病理和临床医学系副教授，美国临床化学学会（AACC）质谱和分离分委会主席，北美华人临床化学学会（NACCCA）主席。

　　纽约州罗彻斯特大学临床质谱实验室主任兼北美华人临床化学学会（NACCCA）主席张岩教授带来了题为《液相色谱-质谱联用技术的临床应用现况及未来发展趋势》的报告。张岩介绍了当前临床质谱技术的应用，主要以小分子为主，例如氨基酸、有机酸、类固醇、生物胺和药物，和一些蛋白质/肽。质谱技术总体趋势和方向是：性能越来越多，仪器尺寸由大变小，低检测限，大分子，高分辨率，由CP向AP转变，工作流由人工向自动化转变。

　　张岩表示质谱技术是一种新兴的技术，越来越多的应用在临床实验室。选择正确的仪器需要理解质谱的基本原理。在将质谱带到临床实验室时，应考虑到人力和财力几方面的问题，这也是最具挑战性和最复杂。

广州金域临床质谱检测中心主任 程雅婷

　　程雅婷：广州金域临床质谱检测中心主任、广州医科大学金域检验学院副教授；多年临床质谱实验室工作和管理经验。

　　广州金域临床质谱检测中心主任程雅婷带来了题为《遗传代谢病串联质谱检测介绍》的报告。程雅婷介绍了遗传代谢病发病机制、遗传代谢病检查、遗传代谢病治疗原则。在串联质谱技术在遗传代谢病检测中的应用中，程雅婷介绍到串联质谱检测干血斑中氨基酸和酰基肉碱，金域遗传代谢病实验室检查流程。在串联质谱遗传代谢病检测项目建设中，程雅婷介绍到串联质谱技术检测遗传代谢病的特点，项目建设难点，遗传代谢病项目质量控制。

复旦大学附属中山医院检验科副主任 郭玮

　　郭玮：复旦大学附属中山医院检验科副主任，上海医学会检验医学分会质谱学组组长，从事质谱检测在临床诊断中的应用研究。

　　复旦大学附属中山医院检验科副主任郭玮带来了题为《液相色谱-串联质谱在临床激素检测中的应用》的报告。报告阐述了质谱方法对于小分子多肽激素类物质检测较免疫方法具有特异性、准确性好及检测效率高的独特优势，是目前世界上公认的检测激素类物质的较好检测方法。郭玮教授介绍了中山医院检验科利用质谱方法检测多种激素类物质，建立了技术平台、质谱方法的性能验证，以及不同方法学的影响因素。在临床实验室中，中山医院检验科是国内为数不多的将质谱技术应用于激素检测的实验室之一，通过不断将新技术在临床诊疗中应用和推广，为实践精准医疗提供助力。

　　 自2011年起成为国家首批临床重点检验专科，受其资助建立了LC-MS/MS法检测MNs的技术平台，最低检测下限可达到20pg/ml。还分别建立了本实验室MNs的参考范围（MN<62.96pg/ml；NMN<191.15pg/ml）和嗜铬细胞瘤特异性诊断切点（MN>139.38pg/ml；NMN>369.05pg/ml）。参考范围上限结合特异性诊断切点的诊断策略有助于嗜铬细胞瘤的明确诊断或排除诊断。目前MNs的年检测量已超过2500例，不但大大提高了临床灵敏度和特异性，检测速度和报告时间也明显加快，切实解决了多年来困扰临床的嗜铬细胞瘤诊断缺少理想实验室检测指标的难题。

徐汇区中心医院中心实验室副主任 李水军

　　李水军：徐汇区中心医院中心实验室副主任，中国科学院上海临床中心研究员，长期从事质谱技术在临床诊断的开发与应用、临床药物分析等研究。

　　徐汇区中心医院中心实验室副主任李水军教授带来了题为《LC-MS/MS在治疗药物监测的临床应用——以地高辛应用举例》的报告。李水军介绍到治疗药物监测（TDM）是通过定量测定生物样品中药物浓度，以评估药物治疗依从性、疗效或者解释药物引起的毒性原因的多学科的临床行为。TDM的目标是将药物浓度控制在治疗窗内。LC-MS/MS法开展TDM的优势是分析特异性和灵敏度较好，可同时检测多个药物（药物和代谢物），灵活性大

　　通量较高，节省成本；不足是自动化程度低，需要严格的方法验证，缺乏牢固性，缺乏全时段的技术服务。需要从特异性、灵敏度、成本和通量解决现有的问题。

　　在LC-MS/MS用于地高辛的TDM应用实例中，李水军介绍到LC-MS/MS方法学验证，免疫法与质谱法的结果比对，免疫法与质谱法的总体差异分析，质谱法与免疫法的相关性分析，符合度分析，不同免疫法及不同厂家之间的差异，方法内差异分析等。

华大基因研究中心 訾金

　　华大基因研究中心訾金带来了题为《运用SWATH/MRM联合技术探索与验证食管鳞状细胞癌生物标志物》的报告。訾金表示研究蛋白质生物标志物过程中，基于抗体的鉴定是受限的。基于DDA(依赖于数据的采集)的蛋白质组学，因为仪器不能在一个给定的时间足够快地扫描所有的前体，许多离子，尤其是低丰度离子，无法被MS/MS碎片收集到，因而也无法被检测到。基于DIA(独立于数据的采集)的蛋白质组学中，DIA 已经被证实在蛋白质组的定性/定量分析的混合中是有效的。然而，宽的M/Z窗口通常伴随着DIA引起的前体干扰，相较于使用DDA获得的数据而言前驱体中选择性减少了5到10倍。SWATH MS的离子选择提取取决于两个标准: 更多高于y3和b3前驱体的碎片离子, 在m/z之间没有重叠的前体。该数据处理和MRM具有相同的结构,因此，从SWATH 中提取定性以及定量信息的这种做法可能适合用于开发基于MRM-MS检测新的鉴定方法。

　　訾金还介绍了使用SWATH对食管鳞状细胞癌生物标志物进行分析；通过MRM鉴定食管鳞癌相关蛋白质；在食管鳞癌血清中鉴定食管鳞癌生物学标志物等。结果表明联合使用SWATH和MRM的DIA策略有着将蛋白质生物标志物的分析和验证的耦合、快速、低实验成本的优点。我们提供了一个清晰的从分析到验证生物标志物的路径，用SWATH 检测294例在混合组织中上调的生物标志物，基于SWATH 数据的基础上检测146例合格的生物标志物 146，使用MRM鉴定133例个体组织中的生物标志物，使用MRM鉴定49例个体血清中的生物标志物，以及使用MRM的操作响应检测13例在个体血清中的生物标志物。血清中的食管鳞癌相关蛋白数据基本上与其他报告一致。

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