LCMS8030定性鉴别阿胶药材

  摘要：本文建立了一种使用岛津高效液相色谱仪LC-20A和三重四极杆质谱仪LCMS-8030联用定性鉴别阿胶药材的方法。本文参照《中国药典(2015版)》中阿胶项下，使用胰蛋白酶酶解阿胶样品，选择阿胶的特征肽作为定性依据；按照药典要求建立了m/z539.8>612.4和m/z539.8>923.8检测离子对，且对照品溶液及市售药材样品中阿胶特征肽的信噪比均远远大于3:1。该方法完全满足药典的要求，实现阿胶药材的快速、准确、炅敏的定性分析。

    关键词：高效液相色谱 三重四极杆质谱 阿胶特征肽段

    胶类药材是具有典型民族特色的传统中药，为动物的皮熬制而成的明胶类物质。阿胶系驴皮经煎煮浓缩成的固体胶，能补血滋阴、润燥止血，用于贫血心悸、燥咳咯血、先兆流产、产后血虚、肌痿无力，是中医临床常用补益药。阿胶经水解后其胶原蛋白变为分子量更小 的肽类，从而失去原有胶原蛋白的性质，无法进行来源鉴别。2015版药典对阿胶的定性方法进行了修订，由2010版的茚三酮显色法修改为采用液质联用的方法检测特征肽段，方法更科学可靠。

    本文利用岛津三重四极杆液质联用系统LCMS-8030对阿胶中的特征肽段进行了分析，建立了阿胶定性鉴别分析方法，可为该类样品的分析提供参考。

    ■实验部分

    1.1 仪器

    岛津高效液相色谱仪LC-20A与三重四极杆质谱仪LCMS-8030联用系统。具体配置为LC-20AD×2输液泵，DGU-20A3在线脱气机，SIL-20AC自动进样器，CTO-20A柱温箱，CBM-20A系统控制器，LCMS-8030三重四极杆质谱仪，LabSolutions Ver.5.60SP2色谱工作站。

    1.2 分析条件

    液相条件

    色谱柱：Inertsil ODS-4 (2.1 mm I.D.×250 mm L., 5μm)
    流动相：A相-0.1%甲酸水溶液
            B相-乙腈
    流速：0.3 mL/min
    柱温：40℃
    进样量：5μL
    洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为5%，洗脱程序见表1。 

    表1 梯度洗脱程序

    质谱条件
    离子化模式：ESI，正离子模式
    离子喷雾电压：+4.5kV
    雾化气流速：氮气3.OL/min
    干燥气流速：氮气15L/min
    碰撞气：氩气
    DL 温度：250℃
    加热模块温度：400℃
    扫描模式：多反应监测(MRM)
    驻留时间：100 ms
    延迟时间：3 ms

    表2 MRM优化参数

    1.3 对照品和样品配制及前处理方法

    取对照药材或待测样品粉末0.1g，加1% NH₄HC0₃溶液50mL，超声处理30min，使用微孔滤膜滤过。参照《中国药典(2015版）》阿胶项下，取滤液100μL，置于进样瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析纯胰蛋白酶适量，加1% NH₄HC0₃溶液溶解，制成每lμL中含lmg胰蛋白酶的溶液)l0μL，摇匀，37℃恒温酶解12h，作为对照药材溶液或供试液，进LCMS-8030分析。

    ■结果与讨论

    2.1 阿胶对照药材的MRM色谱图

图1 阿胶对照药材特征多肽的MRM色谱图

    LCMSMS分析获得阿胶对照药材特征多肽的MRM色谱图，保留时间为：13.76 min，图1中两对特征离子对539.8>612.4以及539.8>923.8的信噪比分别为1161和705，充分满足药典中要求的色谱峰信噪比大于3:1的要求。

    2.2 实际样品分析

    对市售的一种阿胶药材样品进行分析，结果如图2和表3所示。

图2 市售阿胶样品的MRM色谱图

    表3 实际样品中驴皮源特征肽段分析结果

    ■结论

    本文建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪LCMS-8030鉴定阿胶中特征肽段，实现了阿胶定性鉴别的方法。该方法所检测阿胶特征肽段MRM色谱图中离子对539.8>612.4, 539.8>923.8的响应明显，完全满足2015版药典要求色谱峰信噪比大于3:1的要求，市售阿胶药材样品分析结果表明所测样品中含有阿胶成分。因此，本方法可为应对药典要求实现阿胶药材的快速、准确、灵敏的定性鉴别提供参考。