LSCM绿色荧光融合蛋白表达载体的构建

绿色荧光融合蛋白表达载体的构建

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP) 及其突变体能在各种不同的生物系统中表达，这对细胞生物学的研究具有重要意义。而荧光蛋白的折叠能力及其同细胞内蛋白的融合能力，使研究 者能直接在细胞体内观察到蛋白质的特性。研究者不需要把蛋白质经过纯化、标记并再转移到细胞体 内的过程，可直接在细胞水平，甚至是整个动物体水平上观察。当研究者没有合适识别目的蛋白的抗体 时，在细胞内表达绿色荧光融合蛋白不失为一种快捷和合适的研究手段。

荧光蛋白的构建使用标准的分子生物学技术。通过 PCR 扩增目的蛋白的 cDNA，接入到荧光蛋白表达载体的多克隆位点。载体的构建方法和过程参考《分子克隆实验指南(第三版)》。在设计荧光融合蛋白前，研究者应考虑荧光融合蛋白的用途，使用何种荧光蛋白，及荧光蛋白插入的位置(N 端、C端或定位信号序列之后)。