MD酶标仪在黄曲霉毒素定量检测中的应用

一、黄曲霉毒素简介

1.1 什么是黄曲霉毒素

黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要是由黄曲霉(Aspergillus flaw)、寄生曲霉(Aspergillus parasitwus)和集峰曲霉(Aspergillusnomius)产生的次生代谢产物，在中国，目前产生黄曲霉毒素的产毒菌种主要为黄曲霉。

黄曲霉毒素广泛存在于自然界中，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。按照目前毒性分级，动物半数致死量＜10mg/kg体重的物质为剧毒，而黄曲霉毒素B1的半数致死量仅为0.36mg/kg体重，属特剧毒的毒物范围。

2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，黄曲霉毒素在一类致癌物清单中。

1.2 发现黄曲霉毒素

1960年，英国发现有10万只火鸡死于一种以前没见过的病，被称为“火鸡X病”，再后来鸭子也被波及。追根溯源，最大的嫌疑是饲料。这些火鸡和鸭子吃的是花生饼。花生饼是花生榨油之后剩下的残渣，富含蛋白质，是很好的禽畜饲料。这些花生饼被一种来自真菌的有毒物质污染，经过进一步研究和确认后，人们发现了是黄曲霉(Aspergillus.flavus)产生的有毒代谢物质，黄曲霉毒素(Aflatoxins)，是一种黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物。

1.3 黄曲霉毒素的分类、化学结构以及物理化学特性

霉菌毒素有300种之多，其中包括黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮/F2毒素、赭曲霉毒素、T2毒素、呕吐霉毒素/脱氧雪腐镰刀菌烯醇、伏马霉素/烟曲霉毒素等。其中黄曲霉毒素(Aflatoxins)是到目前为止所发现的毒性最大的真菌毒素，目前已分离鉴定出B1、B2、M1、M2、G1、G2、P1、Q和H1等近20种于该类的毒素。它们的化学结构类似，都是二氢呋喃和香豆素的衍生物，其中黄曲霉毒素分子中的双呋喃环结构是产生毒性的重要结构，不同类型黄曲霉毒素结构有所不同，其毒性(从大到小)也有所差异(B1、M1、G1、B2)。黄曲霉毒素主要有4种：即B1、B2、G1、G2，其中B1被认为是主要的有毒物质，有2种这些毒素的代谢产

物M1和M2。其中黄曲霉毒素B1主要存在于农产品，动物饲料，中药等产品中；黄曲霉毒素M1是动物摄入黄曲霉毒素B1后在体内经羟基化代谢的产物，一部分从尿和乳汁排出，一部分存在于动物的可食部分，如乳、肝、蛋类、肾、血和肌肉中，其中以乳最为常见。黄曲霉毒素M1的毒性和致癌性与黄曲霉毒素B1的基本相似。其中黄曲霉毒素B1(CAS号1162-65-8)的分子式：

C17H12O6，分子量为：312.27

1.4 黄曲霉毒素的毒性以及临床表现特征

1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质，具有严重的致癌性、致畸性和致突变性。黄曲霉毒素-tRNA加成物能抑制tRNA与某些氨基酸结合的活性对蛋白质生物合成中的必需氨基酸，如赖氨酸亮氨酸，精氨酸和甘氨酸与tRNA的结合均有不同的抑制作用，从而在翻译水平上干扰了蛋白质生物合成影响细胞代谢。其毒性相当于氰化钾的10倍，砒霜的68倍。动物摄入黄曲霉毒素后，在肝脏中分布最多，含量可为其他器官组织的5-15倍。肾、脾和肾上腺中亦可检出，血液中有极微量，肌肉中一般检不出，如果黄曲霉毒素如不连续摄入，一般不在体内蓄积。由于其对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。黄曲霉毒素含量在30~50μg/kg时为低毒，50~100μg/kg时为中毒，100~1000μg/kg时为高毒，1000μg/kg以上为极毒。黄曲霉毒素中毒的症状一般为一过性发烧、呕吐、厌食、黄疸、腹水、下肢浮肿等肝中毒症状，严重者出现暴发性肝功能衰竭、死亡。有三种临床表现特征，即急性中毒、慢性中毒和致癌性；黄曲霉毒素其纯品为无色结晶，在紫外线下黄曲霉毒素B1、B2发蓝色荧光，而黄曲霉毒素G1、G2 发绿色荧光。黄曲霉毒素的相对分子量为312-346。难溶于水，易溶于油，甲醇丙酮和氯仿等有机溶剂，但不溶于石油醚己烷和乙醚中。一般在中性溶液中较稳定，但在强酸性溶液中稍有分解，在pH9-10的强碱溶液中迅速分解。耐高温黄曲霉毒素B1的分解温度为268℃紫外线对低浓度黄曲霉毒素有一定的破坏性。

• 急性中毒：它的毒害作用，无论对任何动物，肝脏变化，呈急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。脾脏和胰脏也有轻度的病变。

• 慢性中毒：其主要变化特征为肝脏出现慢性损伤，如肝实质细胞变性、肝硬化等。出现动物生长发育迟缓，体重减轻，母畜不孕或产仔少等系列症状。

• 致癌性：可诱发多种癌，AFT主要诱发肝癌，还可诱发胃癌、肾癌、泪腺癌、直肠癌、乳腺癌，卵巢及小肠等部位的肿瘤，还可出现畸胎。