PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性，模板DNA与引物的退火(复性)，引物的延伸。重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。反向PCR（inverse-PCR）反向PCR（inverse-PCR）是克隆插入片段侧翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假阳性太多，而Inverse-PCR一般只要有特异条带，基本上就是目的片段。
直接原位PCR
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。 间接原位PCR（原位杂交PCR） 与直接原位PCR所不同的是，靶基因在扩增时不进行标记基团的掺入，而是标记一段与扩增片段互补的探针，在扩增结束后，应用此探针进行原位杂交。因此，此处主要介绍原位杂交，其余方法同原位PCR。 逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR） 逆转录-聚合酶链反应(Reverse
Transcription-Polymerase Chain
Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。 实时荧光定量PCR（realtime PCR） 所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。重叠延伸PCR重叠延伸PCR技术（gene
splicing by overlap extension
PCR，简称SOEPCR）由于采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成了重叠链，从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。 甲基化PCR甲基化特异性聚合酶链反应（MSPCR） 其作用原理基于DNA经亚硫酸氢钠处理后，来自父方非甲基化序列的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而来自母方甲基化序列则保持不变，随后用具有高度特异性的引物进行扩增。 降落PCR 降落PCR（touchdown
PCR），一种PCR技术，主要用于PCR的条件的优化。在许多情况下引物的设计使得PCR难以进行，例如特异性不够易错配等。退火温度过高会使PCR效率过低，但退火温度过低则会使非特异扩增过多。差示反转录PCR实验差示反转录PCR也称为mRNA差异显示技术，它是将mRNA反转录技术与PCR技术二者相互结合发展起来的一种RNA指纹图谱技术，简便、灵敏、RNA用量少、效率高、可同时检测两种或两种以上经不同处理或处于不同发育阶段的样品，该方法自问世以来被广泛用于差异表达基因的克隆鉴定研究中。 第三代PCR技术 第一代PCR就是常见的定性PCR技术，它采用普通PCR仪来对靶基因进行扩增，采用琼脂糖凝胶电泳来对产物进行分析。第二代PCR就是荧光定量PCR技术（Real-Time
PCR，qPCR），它通过在反应体系中加入能指示反应进程的荧光试剂来实时监测扩增产物的积累，借助荧光曲线的Cq值来定量起始靶基因的浓度。 第三代PCR技术--数字PCR（Digital PCR，dPCR，Dig-PCR），是一种全新的对核酸进行检测和定量的方法。它采用直接计数目标分子而不再依赖任何校准物或外标，即可确定低至单拷贝的待检靶分子的绝对数目。 PCR芯片技术PCR仪器发展的趋势之一变得更加微型化，PCR芯片就是在这种趋势下诞生的。PCR芯片就是在微型的载体上进行PCR反应，是微型化的PCR仪。芯片PCR不仅节省了大量反应试剂因此降低了实验成本，还有助于提高反应速度。
全球新冠疫情爆发以来，原本只能在专业实验室开展的核酸检测逐步为大众所认知，而对于疫情控制需要现场快速检测的紧迫需求也驱动着全球诊断企业加速技术革新。例如，美国CueHealth成功开发了小型、便捷核酸......
近年来，晚期前列腺癌的治疗手段迅速发展，每年都有新的治疗药物上市。特别是去势抵抗性前列腺癌（CRPC），多种疗法都获得了不同程度的成功。如今通过abiraterone或enzalutamide来抑制雄......
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最近，在国际知名学术期刊《Small》发表的一项研究中，研究人员成功地应用一种新的定性和定量方法，来检测利什曼原虫（Leishmaniainfantum）动基体（kinetoplast，是利什曼原虫独......
5月20日，中国科学院合肥物质科学研究院技术生物与农业工程研究所邀请南京润亚生物科技发展有限责任公司技术总监围绕数字定量聚合酶链式反应技术（简称PCR技术）进行专题培训。培训老师首先阐述了PCR技术的......
据sciencedirect数据库消息，2013年4月《国际食品微生物杂志》刊登一项采用PCR快速筛选法分离肉与发酵肉制品中肠球菌的研究，研究人员利用此法成功分离出了29个肠球菌菌株。肠球菌主要存在于......
酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，可以研究活细胞内蛋白质的相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间作用也能够通过报告基因的表达产物检测得到。酵母双杂交文库构建是筛库的前提，可用于目的蛋白的互作蛋白......
PCR技术基本原理PCR技术的基本原理:类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热......
Transgenomic公司推出了名为ICECOLD-PCR的突变检测技术，该项突破性癌症基因检测技术使用已安装在世界各地实验室的标准测序设备，将无与伦比的敏感性和完整的DNA突变检测巧妙的结合于一体......
内容摘要：PCR的基本原理是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板，末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，不断重复这一......
