PCR技术

实验方法原理 PCR是在模板DNA、引物和dNTPs的存在下依赖于DNA聚合酶的酶促反应。PCR技术的特异性取决于引物和模板结合的特异性。反应分为变性、退火、延伸三步，经过一定的循环，介于两个引物之间的特异DNA片段得到大量扩增。

实验材料 转基因水稻叶片DNA引物

试剂、试剂盒 矿物油MgCl2PrimerdNTP水溴酚蓝琼脂糖凝胶EB

仪器、耗材 离心机电泳仪紫外检测仪

实验步骤

1.  调整模板浓度至10 ng/ml

2.  按下列体系配制反应混合液，混匀，加一滴矿物油，离心5秒

Template DNA        （20 ng）2 

buffer              2.0 ´10 μl

MgCl2（25 mM）        1.5 μl

lmPrimer F (10 mM)        0.2 μl

Primer R (10 mM)        0.2 μl

lmdNTPs（2 mM）        2.0 μl

Taq（5 U/μl）  2.0 μl

Add ddH2O  to    20 μl

3.  PCR反应循环条件设置：

95 ℃                     1 cycle

94 ℃   55 ℃  1'   72 ℃  1'30"   35 cycles

72 ℃                    1 cycle

4 ℃                       forever

溴酚蓝，混匀，短暂离心，取15 ml

4.  检测：加2 ml反应产物点样电泳；

5.  在1%的琼脂糖凝胶上点样电泳；EB染色，紫外观察。