PCRSSP在造血干细胞移植配型中的应用

　　人类白细胞抗原(HLA)系统是一组组成和结构都非常复杂的基因复合体。HLA分型首先采用血清学方法，现在DNA分型是常规方法。我们采用序列特异性引物(PCR-SSP)技术对HLA-Ⅰ类基因进行分型，现报告如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  样本 

　　青岛地区拟进行造血干细胞移植的20例恶性血液病患者及其30例相关供者的血液标本。

　　1.2  方法 

　　采用Gentra试剂盒提取DNA，用基因定量仪测定浓度和纯度。基因扩增采用Micro SSPTMHLA-A/B/DR DNA分型试剂盒，严格按照说明书操作。扩增产物2%琼脂糖进行电泳后凝胶成像系统判读结果。

　　2  结果
 
　　对50例造血干细胞移植供受者HLA-Ⅰ类基因进行了成功的分型。

　　3  讨论

　　HLA基因位于人类第6号染色体短臂6p21.31，HLA复合体结构十分复杂，具有多基因性和多态性。异基因造血干细胞移植是治疗恶性白血病的有效方法，但移植后会发生GVHD严重影响移植效果，移植前供、受者HLA配型可以有效的防止GVHD的发生。

　　HLA配型技术包括血清学、细胞学和DNA分型技术。随着对HLA-Ⅰ类分子研究的不断深入，新确定的特异性位点逐年增加，血清学方法无法获得能够分辨出所有特异性位点的标准抗血清，且血清学之间有交叉反应。细胞学方法由于分型细胞来源困难、方法繁琐、试验流程长，不适于常规检测。PCR-SSP方法操作简单快速，重复性好，实验结果容易判读，杂合子也很容易检出，是目前应用比较广泛的DNA分型技术［1，2］。我们在50例样本中都能成功分型，没有假阳性和假阴性，整个实验可在3h内完成。

　　综上所述，HLA-Ⅰ类基因分型PCR-SSP技术准确、特异，可作为造血干细胞移植配型和正常人群无关供者筛选的常规方法。

　　【参考文献】

　　1  Maduigal JA，Arguello R，Scott I，et al.Molecular histocompatibility typing in unrelated donor.one marrow transplantation.Blood Rev，1997，11(5)：105-117.

　　2  戴宇东，孙启俊，张益红，等.应用PCR-SSP进行HLA-AB基因分型及血清学方法的比较.临床检验杂志，2001，19：272-273.