RNAi表达载体构建

近年来的研究表明，一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型， 称为RNA干扰（RNA interference，RNAi）。siRNA（small interfering RNAs）就是这种短片断双链RNA分子，能够以序列同源互补的mRNA为靶目标，降解特定的mRNA。RNAi的发现具有划时代的意义，它不仅深入揭示 了细胞内基因沉默的机制，而且它还是后基因组时代基因功能分析的有力工具，极大地促进了人类揭示生命奥秘的进程。现在越来越多的研究人员开始采用RNAi 来研究生物体的基因表达。RNAi技术可广泛应用到包括功能基因组学，药物靶点筛选，细胞信号传导通路分析，疾病治疗等等。

目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括

·         化学合成 

·         体外转录 

·         长片断dsRNAs经RNase III 类降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III)

·         siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs

·         PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达

五种方法优缺点比较如下：