SDS法提取植物基因组DNA

本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后，加入高浓度的KAc，0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质，最后用乙醇或异丙醇沉淀。

一 材料、试剂和仪器

1 材料 新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料

2 试剂

(1)提取缓冲液

Tris-HCl 100mmol/L（pH8.0）

EDTA 50mmol/L （pH8.0）

NaCl 500 mmol/L

灭菌后加β-巯基乙醇至10 mmol/L

(2)裂解液20%SDS

(3)高盐溶液5mol/L KAc

(4) RNaseA 10mg/ml

(5) 异丙醇

(6)灭菌ddH2O或TE

3. 仪器: 离心机， 恒温水浴, 台式高速离心机，电泳装置

二 实验程序

1取幼嫩的组织材料1-2g,用蒸馏水冲洗干净，再用灭菌ddH2O冲洗2次，放入经液氮预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉末状，用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到加有500μL提取液的离心管中,轻轻混匀。

2 向管中加入50μL20%SDS溶液，混匀，不可过于强烈震荡以防基因组DNA断裂 ，65℃保温10min，并不时摇动。

3 加入150μL 5mol/L KAc，混匀，置冰上20-30 min。

4 4℃,15 000rpm离心15min,转移上清到另一离心管中，加入0.7V的异丙醇，混匀，-20℃沉淀30 min 。

5 12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀，吹干后加入适量的灭菌ddH2O或TE溶解DNA。

6 加入1/10体积的RNaseA，37℃保温20min，除去RNA。

7 CI抽提后，加2V乙醇，-20℃沉淀30 min 。12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀。

8 用400μL 70%乙醇洗一次后，吹干，加入适量的灭菌ddH2 O或TE溶解DNA。

9 电泳检测完整性。