WesternBlot实验相关试剂的配制（二）

100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA）

BSA                           0.1g

0.15 mol/L NaCl                   1ml

溶解后-20℃保存。制作蛋白标准曲线时，用0.15 mol/L NaCl进行100倍稀释成1mg/ml，-20℃保存。

还原型 5XSDS 上样缓冲液  

0.5 mol/L Tris·HCl （pH6.8）    2.5ml

二硫叔糖醇（DTT，MW154.5）      0.39g

SDS                             0.5g

溴酚蓝                          0.025g

甘油                            2.5ml

混匀后，分装于 1.5ml 离心管中，4℃保存。

电泳液缓冲液    

Tris （MW121.14）          3.03g

甘氨酸（MW75.07）        18.77g

SDS                            1g

蒸馏水至                     1000ml

溶解后室温保存，次溶液可重复使用 3～5 次。

（电泳液可以回收重复利用，一般将回收的电泳液加入垂直电泳槽的下半部分，上半部分最好使用新鲜的电泳缓冲液）

（可以配制成 10×电泳缓冲液进行保存，稀释 10 倍使用）

转移缓冲液    

半干

24mmol/L Tris （MW：121.14）     1.4536 g

192mmol/L  甘氨酸（MW：75.07） 7.20672 g

20 ％甲醇                        100 ml

蒸馏水至                         500ml

浸渍（湿转）

48mmol/L Tris             2.375g

39mmol/L 甘氨酸           11.25g

20 ％甲醇                  200ml

0.0375％SDS            0.375g

蒸馏水至                  1000 ml

溶解后室温保存，次溶液可重复使用 3～5 次（次溶液最好保存在 4 度冰箱，最多使用 5 次左右，不然影响转移效率）。（先用蒸馏水溶解甘氨酸、Tris 和 SDS，然后再加入甲醇，最后补足液体。如果先加入甲醇，溶解甘氨酸、Tris 和 SDS 等比较困难）

（可以配制成 2×转移缓冲液进行保存，稀释后使用）

10X 丽春红染液  

丽春红 S         2g

三氯乙酸        30g

磺基水杨酸      30g

蒸馏水至         100ml

TBS 缓冲液 

1 mol/L Tris·HCl （pH7.5） 10ml

NaCl                        8.8g

蒸馏水至                    1000ml

（可以配制成 10×TBS 缓冲液进行保存，稀释 10 倍使用）

TBST 缓冲液       

20 ％Tween20        1.65ml

TBS                700ml

混匀后即可使用，最好现用现配。

封闭液       

脱脂奶粉（国产）             5g 

TBST                         100ml

最好现用现配。

洗脱抗体缓冲液  

14.4 mol/L β-巯基乙醇                  700μl（通风厨里加）

SDS                                                  2g

0.5mol/L Tris·HCl （pH6.8）                   12.5ml

超纯水至                                           100ml

配制时，在通风厨内进行。4℃保存。可重复使用 1 次。（可用可不用）