如果能够排除下面的几个问题那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
1）二抗的HRP 活性太强，将底物消耗光；
2）ECL底物中H2O2不稳定，失活；
3） ECL底物没覆盖到相应位置；
4）一抗选择不当；
5）二抗失活。
