细胞培养常见问题分析
细胞常见问题分析 1、冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后，须立即放放37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可以超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另外冻管由液氨桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。 2、可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 不能。每一细胞株均有其特定使用自己适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同的之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。 3、可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产品极大的影响。来自不同特种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 4、悬浮性细胞应如何继代处理？ 一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微......阅读全文
水质分析常见问题
13、请问做氨氮实验时，为什么加入N3试剂出现大量白色浑浊，加入N2试剂后下层红色上层青色不断有小气泡上升?答：钙镁离子高，应做絮凝沉淀预处理。水样带色或浑浊以及含其他一些干扰物质，影响氨氮的测定。因此，在分析时需做适当的处理。对较清洁的水，可采用絮凝沉淀发;对污染严重的水或工业废水，则用蒸馏法消除
水质分析常见问题
19、含氯酸钠废水COD如何检测?答：含氯酸钠废水的COD检测水样的原水COD很高，用户使用了氯酸钠来处理，氯酸钠具有氧化性，能降低COD，但这种废水，使用正常方法无法检测，经过查找资料及连华技术人员的建议，我们进行了方法测试，找到解决方案。1)取2.5ml水样，加入4.8ml的E试剂，注意速度不要
细胞培养的八个常见问题与解答(FAQ)
1 冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后，须立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。 2 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DM
牛胚气管细胞培养常见问题及解决方案
牛胚气管细胞培养基及培养冻存条件准备：1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用
动物细胞培养基常见问题20问（二）
11.为什么有客户要求培养基中不含酚红？研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，细胞培养，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加酚红的培养基。12.酚红的作用是什么？酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂：中
动物细胞培养基常见问题20问（一）
培养基是细胞培养中不可缺少的营养成分，但是最基础的培养基却给实验者带来了一系列的问题。别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。1.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件？ATCC（American Type Culture Collection）收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cel
细胞培养常见问题及可能原因的建议解决方案
细胞培养常见问题及可能原因的建议解决方案 培养基pH值变化迅速 培养箱CO2分压设置错误---根据培养基中NaHCO3的浓度增大或降低培养箱CO2的分压，NaHCO3浓度为2.0-3.7g/L时，应相应地使用5%-10%的CO2分压 细胞培养瓶瓶盖过紧---将瓶盖旋松1/4
细胞培养常见问题及可能原因的建议解决方案
培养基pH值变化迅速培养箱CO2分压设置错误---根据培养基中NaHCO3的浓度增大或降低培养箱CO2的分压，NaHCO3浓度为2.0-3.7g/L时，应相应地使用5%-10%的CO2分压细胞培养瓶瓶盖过紧---将瓶盖旋松1/4圈碳酸氢盐缓存系统缓冲能力不足---加入HEPES缓冲液，使其终浓度为1
细胞培养板的选择与常见问题解答（二）
(4)细胞分布不均及解决办法问：我的细胞接种培养板，细胞总是聚集在周边部分，该如何处理啊？我看园子里有的战友的细胞却是聚集在中间，是不是板子的质量问题啊？答：请问你的细胞是如何混匀的？是滴管吹打还是振荡培养板？如果是后者，而且是转圈摇匀的话，很有可能由于离心力的作用使细胞甩到周边部分，导致细胞中间少
细胞培养板的选择与常见问题解答（一）
细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底（U型和V型）；培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等；根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。（1）平底和圆底（U型和V型）培养板的区别和选择：贴壁细胞一
PCR克隆常见问题分析
1、克隆PCR产物的最优条件是什么？ 最佳插入片段：载体比需实验确定。1:1（插入片段:载体）常为最佳比，摩尔数比1:8或8:1也行。应测定比值范围。连接用5ul 2X连接液, 50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶，插入片段共10ul。室温保温1小时，或4℃过夜。在
测序常见问题及其分析
1、PCR 产物测序时出现重叠峰问题图1（模板中有碱基缺失，往往是单一位点（1-1）或两个位点（1-2）碱基缺失导致测序结果移码）解决方法：将PCR 产物克隆到质粒（如T 载体）中挑单克隆测序，或将PCR 产物进行PAGE纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进行测序。问题图2（PCR 产物不纯，
QPCR常见问题及其分析
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为10
PH计常见问题分析
常见问题及解决方案1.同一样品，两次测量的 pH值不一样？温度变化或样品本身发生了化学反应，都会引起 pH值的变化。所以，应尽量保持温度一致，并且避免化学反应。2.同一样品，同时在两台 pH计上测量，读数不一致？由于两台 pH计的校正条件不一样（如，不同时间做的校正），造成测量值有差异。所以要用同一
QPCR常见问题及其分析
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400
QPCR常见问题及其分析
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓度为100-400
TA克隆常见问题分析
现象可能原因解决方案 转化后无菌落生长 感受态细胞已经失效用pUC18质粒进行转化，确认细胞的感受态效率。1ng pUC18质粒至少应得到1000个以上的转化子。如有问题，重新制备感受态细胞。 平板所用抗性不对pBS-T载体为amp抗性，工作浓度 100 ug/ml 连接中使用了不恰当的vector
测序常见问题及其分析
1、PCR 产物测序时出现重叠峰 问题图1（模板中有碱基缺失，往往是单一位点（1-1）或两个位点（1-2）碱基缺失导致测序 结果移码） 解决方法：将PCR 产物克隆到质粒（如T 载体）中挑单克隆测序，或将PCR 产物进行PAGE 纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进
测序常见问题及其分析
1、PCR 产物测序时出现重叠峰 问题图1（模板中有碱基缺失，往往是单一位点（1-1）或两个位点（1-2）碱基缺失导致测序 结果移码） 解决方法：将PCR 产物克隆到质粒（如T 载体）中挑单克隆测序，或将PCR 产物进行PAGE 纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进
QPCR常见问题及其分析
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引物终浓
细胞培养（cell－culture）的一些常见问题与解答1
1、细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++， Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0， 温度37 ℃其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一
细胞培养（cell－culture）的一些常见问题与解答2
6、血清的有关问题：新生牛血清：新出生牛5天内取血制成小牛血清：小牛出生16周以内采血制成。胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。根据血清的生产工艺及血红蛋白、内毒素含量又分为：（1）特级胎牛血清：40纳米过滤，内毒素含量≤10EU，血红蛋
细胞培养（cell－culture）的一些常见问题与解答2
6、血清的有关问题：新生牛血清：新出生牛5天内取血制成小牛血清：小牛出生16周以内采血制成。胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。根据血清的生产工艺及血红蛋白、内毒素含量又分为：（1）特级胎牛血清：40纳米过滤，内毒素含量≤10EU，血红蛋
细胞培养（cell－culture）的一些常见问题与解答1
1、细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++， Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0， 温度37 ℃其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一
超滤器的常见问题分析
由于超滤器的物质分离功能是依靠“膜”来实现的，所以，它和其他膜分离设备一样，在使用过程中，总会发生膜污染和通量的递减。不过，这个问题对于以滤膜筛分为原理的超滤器来说，更为显著。这种膜污染常发生在三种场合，即浓差极化、大溶质的吸附和吸附层的聚合。 浓差极化超滤器运行时，溶质中分子混合物由静压力带到膜表
使用涂层测厚仪常见问题分析
使用涂层测厚仪常见问题分析使用涂层测厚仪常见问题分析？涂层测厚仪可无损地测量磁性金属基体（如钢、铁、合金和硬磁性钢等）上非磁性涂层的厚度（如铝、铬、铜、珐琅、橡胶、油漆等） 及非磁性金属基体（如铜、铝、锌、锡等）上非导电覆层的厚度（如：珐琅、橡胶、油漆、塑料等）。1.仪器开机没反应怎么办？答：首先检
凝胶电泳常见问题分析
要跑琼脂糖凝胶电泳， 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗？能够照相的清楚的条带，至少需要多少量呢？ 参考见解：5ng 已经可以了，但是或许20ng50ng-200ng效果好，在此范围内呈线性。 把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝
PCR常见问题分析与对策
1.PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 2.假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白
水质分析常见问题解析
水质分析又称水化学分析。即用化学和物理方法测定水中各种化学成分的含量。水质分析过程中常见的问题有哪些呢？ 01、BOD缓冲剂液化了还能用吗? 答：BOD缓冲剂时间稍长后会出现液化的现象，这是正常情况，不影响使用。 02、我们测氨氮，是以氮元素计还是以铵根离子计? 答:氨氮是指水中以游离氨和铵根离子形
凝胶电泳常见问题分析
要跑琼脂糖凝胶电泳， 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗？能够照相的清楚的条带，至少需要多少量呢？参考见解：5ng 已经可以了，但是或许20ng50ng-200ng效果好，在此范围内呈线性。把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大