bradford和lowry两者都是生物检验的化学试剂。
bradford法,也称考马斯蓝染色法(coomassie blue staining)。考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在 465nm,后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内(0~100μg/ml),蛋白质-色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。故可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速,其结合物在室温下1h内保持稳定。该反应非常灵敏,可测微克级蛋白质含量,所以是一种比较好的蛋白质定量法。
Lowry法是双缩脲法和福林酚法的结合与发展,其原理是:蛋白质溶液用碱性铜溶液处理,形成铜-蛋白质的络合盐,再加入酚试剂后,除使肽链中酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等显色外,还使双缩脲法中肽键、碱性铜的显色效果更强烈。因此,Lowry法的显色效果比单独使用酚试剂强烈3~15倍,为双缩脲法100 倍。由于肽键显色效果增强,从而减小了因蛋白质种类引起的偏差。Lowry法的试剂由两部分组成,试剂甲相当于双缩脲试剂(碱性铜溶液),可与蛋白质中的肽键起显色反应;试剂乙为磷钨酸和磷钼酸混合液,在碱性条件下极不稳定,易被酚类化合物还原生成钼蓝和钨蓝混合物而呈蓝色反应,因此蛋白质的酪氨酸和胱氨酸等可显色,颜色深浅与蛋白质含量成正比。
LoWry法是双缩脲法(Biuret)和福林酚法(Folin-酚)的结合与发展。其原理是蛋白质溶液用碱性铜溶液处理后,碱性铜试剂与蛋白质中的肽键作用产生双缩脲反应,形成铜—蛋白质的络合盐。再加入酚试剂......
一、实验目的1、了解测定蛋白质的常用方法2、掌握蛋白质含量测定的经典Lowry–Folin法。二、实验原理在碱性溶液中,蛋白质中的肽键与铜盐可产生双缩脲反应,产生络合物,此络合物会将磷钼酸-磷钨酸试剂......
【摘要】目的:制定宫颈癌片中蛋白质的含量测定方法。方法:采用Lowry法测定含量,以660nm为测定波长测定吸收度。结果:宫颈癌片中水溶性蛋白质在0.048~0.144mg/ml范围内线性关系良好(r......