动物细胞培养基常见问题20问（二）

11.为什么有客户要求培养基中不含酚红？

研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，细胞培养，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加酚红的培养基。

12.酚红的作用是什么？

酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。

13.你公司干粉培养基里含NaHCO3吗？

所有的干粉培养基中都不含NaHCO3 。请依据说明书或包装袋上的标注，在干粉培养基完全溶解后添加NaHCO3 。

14.NaHCO3的作用是什么？

与CO2一起形成缓冲系统，保持培养基PH值稳定。

15.我们实验室培养箱CO2浓度一直以来都是5%，这样可以吗？

当然不可以，不同的培养基要求添加NaHCO3的量不一样，如DMEM要求添加3.7g/L，为了保持PH值稳定，必须用高浓度的CO2平衡，一般不低于8%，而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L，还有些培养基要求添加更少，那么这些培养基就要求较低的浓度平衡，一般是5%。

16.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。

丙酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM，-20℃保存，培养基中的终浓度为1mM.

17.谷氨酰胺的作用是什么？

几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20℃冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。

18.在培养基中加入HEPES有何好处？

培养基中最常用的Buffer system是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer，加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。

Hepes的贮存液浓度一般为1M，常温保存。培养基中的终浓度为25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培养基中。

19.GlutaMAX-Ⅰ是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ？这个二肽有多稳定？

GlutaMAX-Ⅰ是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的a-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常稳定，即使在121℃灭菌20min， GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最小的降解；而在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。

 L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的，但其在溶液中不稳定，经过一段时间后会降解，确切的降解率一直没有最终确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是细胞培养中谷氨酰胺的替代品。

20.可否使用与原先培养条件不同的培养基？

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同的培养基，细胞大多无法立即适应，造成细胞无法存活。