miRNA信号通路参与创伤性异位骨化（二）

此外，通过对BMP4和TGF-β2诱导的人HD-MVECs进行ALP和alizarin red S染色，研究人员进行了成骨细胞分化检测。结果显示，miR-630 KD可以显著增加成骨细胞分化，上调成骨相关基因表达，而miR-630过表达有相反表现。因此，miR-630抑制HO过程中的骨生成。通过对诱导HO过程中的小鼠X-ray检测也得到了同样的结果。射线密度和骨体积分析显示，过表达或者KD miR-630可以抑制和促进骨密度和体积。因此，该结果表明，miR-630下调对HO相关的EndMT过程，及MSC-like表型的出现都密切相关。

4.miR-630作用靶基因鉴定
    既然miR-630调控HO过程，那么，它的作用靶基因是哪个呢？通过PicTar和TargetScan预测，发现Slug可能是其靶基因。对Slug的3’UTR区进行突变，处理miR-630 mimics，报告激团检测发现miR-630可以显著降低对照Slug的表达。同时，异位表达miR-630可以显著下调Slug的mRNA和蛋白表达水平，抑制BMP4和TGF-β2引起的Slug上调。因此，Slug是miR-630的直接调控靶基因。

为了进一步验证上述调控过程，研究人员进行了补救实验。过表达Slug可以颠倒miR-630诱导的内皮markers上调和间叶细胞marker下调，补救由于miR-630抑制HO过程中小鼠的后肢矿物沉积。骨密度和体积检测也显示，Slug可以补救miR630的抑制作用，修复Osteocalcin，osteopontin和Runx2表达下调。因此，miR-630对EndMT的抑制和骨生成抑制是通过直接调控Slug实现的。