近年来,质谱技术的快速发展及其高灵敏度、高特异性和高准确度的特点,使得其在临床检验中得到的关注越来越多,应用也越来越广泛。液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)由于其适用分析的化合物范围广泛(极性和非极性化合物),且一次分析可检测多个化合物,获得丰富的化合物结构信息,是目前在临床领域应用最广泛的质谱技术,已广泛应用于遗传代谢病检测、毒理和滥用药物监测、治疗药物监测、类固醇激素检测、营养素检测等多个方面。
临床LC-MS/MS检验的对象,均为存在于生物样本(如血浆、血清、全血、尿液、唾液、胆汁、组织等)中的生物标志物,生物样本基质的高度复杂性使得临床LC-MS/MS方法的开发与验证具有其自身的特殊性,那么,如何开发建立稳定的、适用于临床应用的LC-MS/MS方法?
LC-MS/MS分析方法用于临床常规检验之前,必需进行条件优化和性能验证,分为方法开发和验证两个主要方面。
方法开发的过程包括:文献检索、质谱方法建立、液相方法建立和前处理方法建立四大步。
第一,文献检索。文献检索过程要解决的问题包括:
(1)样品前处理方法:样品类型、样品量、处理方法的选择,需要考虑样品处理的效果、试剂、耗材及时间成本;
(2)质谱方法: 离子化方式、质量分析器的选择、仪器型号、扫描方式的选择、离子检测通道及相应质谱参数;
(3)液相色谱方法:色谱柱的选择、流动相的组成、洗脱方式、进样量。
第二,质谱方法建立。质谱方法建立需完成以下步骤:
第三,建立液相色谱方法建立。液相色谱方法的建立需要考虑以下内容:
第四,样品前处理方法建立。生物样本(如血浆、血清、全血、尿液、唾液、胆汁、组织等)基质的高度复杂性使得临床LC/MS/MS方法开发过程中,样品前处理非常重要。样品前处理具有净化样品、提高灵敏度、保护进样系统、延长色谱柱使用寿命、缩短色谱分析过程、提高检测通量等优点。样品前处理方法的建立需要考虑以下内容:
(分析测试百科网赵蓓蓓博客链接:干货来袭—— 跟金域学习临床LC-MS/MS方法的开发和验证)
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