激光扫描共聚焦显微镜光学成像原理

      LSCM 主要基于共轭焦点技术设计而成，即以激光作为光源，采集时使激光光源、被测样品和探测器处于彼此的共轭位置上。基本工作过程为:光源发射出的激光束经挡板上的照明针孔后形成一个点光源，其射出飞光线经双色反射镜发射后，通过显微物镜聚焦到样品上的一点，该点由光源照射激发出荧光，透过显微物镜和双色发射镜聚焦到探测针孔形成共焦点，可由光电倍增管探测收集，被探测点所在的平面即为共交平面，经过计算机处理、成像和存储过程，便得到了交面上一点的成像。同时，激光光束对样品进行切面扫描，便可实现该平面的光学断层成像，载物台沿 Z 轴方向缓慢移动，可以使不同深度的样品层进入焦平面，又可得到不同深度样品层的成像。成像过程中，只有样品焦平面上的点所激发的荧光可以在检测针孔正确聚焦，从而备光电探测器接收，焦平面以外的光线到达检测针孔时处于离焦状态，因此被直接滤除，可见共焦探测针孔就像一个滤波器，非共焦面的背景均呈黑色，增强了反差，极大地提高了激光扫描共聚焦显微成像系统的清晰度。