在硒的生物化学作用被逐渐认识的今天,要求提供精确的分析数据.由于经典的荧光光度法测定硒,条件比较苛刻,本文采用氢化物发生原子吸收法测定了人体、全血头发样品中硒的含量。在确定了仪器的zui佳工作条件的基础上,着重研究了测定全血,头发样品中硒的前处理方法及干扰试验.本法相对标准偏差小于0.5%,标准加入回收率在95.7~102%之间,适用于开展流行病学调查和临床分析的研究.
实验部分
一 仪器及工作条件
原子吸收光谱仪
氢化物发生器（WHG-103A型）
金属套玻璃高效雾化器（WNA-1型）
硒空心阴极灯
电热石英管
波长196.0nm,灯电流5mA,狭缝1.3nm,空气流量1.00kg·cm-2, 乙炔流量0.05kg· cm-2 ,测量方式直示,计算方是用峰高,校准曲线或标准加入方法曲线,计算时间13s,延迟时间0.5s,进样量3ml,载气流速Ar100ml·min-1 ,进样时间30s,反应时间15s.
二 试剂
硒（IV）标准贮备液:1000ug·ml-1,由高纯硒粉配置.硒中间标准溶液5ug·ml-1.
硼氢化钾:1.5%溶液中含有0.1%的氢氧化钠,用时现配.
亚沸蒸馏水
三 试样处理
准确取0.20ml血液试样或0.2000g头发试样于20ml（12mm）刻度石英试管中,加入2ml浓HNO3,放置过夜,次日在加入0.5mlHClO4,置于160ºC恒温沙浴中加热消化至溶液成呈淡黄色后（约4h）,加入1mlH2O2,继续加热消化至溶液清亮（约1h）取出,测定前用HCl（30%）溶液定容.
于试样处理的同时制备试剂空白.
四 校准曲线的绘制
校准曲线
用微量定量取样器吸取硒中间表准溶液,0,10,30,50和70ul分别放入50ml量瓶中,用HCl（30%）溶液稀释到刻度,获得浓度分别为0,1.0,3.0,5.0和7.0ng·ml 硒的标准系列溶液.
标准加入法曲线
移取10ml试样+10mlHCl（30%）:10ml样液+10ml 2ng·ml-1硒标准溶液; 10ml样液+10ml 10ng·ml-1硒标准溶液; 10ml样液+10ml 14ng·ml-1硒标准溶液,制成均含HCL（30%）溶液的硒标准加入法系列溶液.
结果与讨论
一 试样前处理方法的考察
试样的前处理是至关重要的.目前测定硒的前处理方法普遍采用湿法消化,常用的分解装置有高型烧杯,三角锥瓶,高压分解坩锅和配有回流冷凝器的凯氏烧杯.由于前两种装置分解式样时,使用的酸量较大,硒易挥发损失,而且这些方法得消化液均需要转移定容,易引起较大的误差.本法采用刻度石英试管,HNO3+HclO4+H2O2+HCl氧化还原体系,于160ºC恒温沙浴中消化血液头发试样.由于石英试管上端能起到空气的冷凝回流作用,因而试剂不易挥发,试样消化完全.与配有冷凝管的烧瓶消化法比较,具有操作简单,试剂和式样用量少,减少转译的误差等优点.本法与水冷凝管的凯氏烧瓶消化法比较的结果见表1.
表1 分解方法的比较
统计参数* | 本法 | 水冷凝管烧瓶法 | ||
全血 （ng·ml-1 ） | 头发 （ng·g-1 ） | 全血 （ng·ml-1 ） | 头发 （ng·g-1 ） | |
X+SD | 144.5+6.9 | 66.5+13.0 | 145.0+7.1 | 664.8+14.4 |
N | 50 | 50 | 50 | 50 |
RSD% | 4.8 | 2.0 | 4.9 | 2.2 |
* X: 硒的平均值 n: 测定次数 SD: 标准偏差 RSD:相对标准偏差
二 常见共存例子的干扰试验
我们调查了存在于血液,头发中的25种共存例子对痕量硒测定的干扰试验,结果表明,下述离子（ug·ml-1）不干扰5ng·ml-1硒的测定:Ca（700）, Na 、Fe3+（500）, Mg、K（200）, Cu、Zn（5）,Ni、Mn、Al（1）, Cr6+、Co（0.2）, Mo、As3+、Bi、Sr、Ti、Hg、Sn2+ （0.1）,Si、Ba（0.5）,Pb（0.06）,Cd（0.05）以及NO3-、ClO4-、H2O2（0.5M）.
锑（Ⅲ）0.05 ug·ml-1不干扰,含量≥0.1 ug·ml-1有负干扰,但血液头发中锑的含量一般都低于此值,再者经过了相对的稀释,它不会给本法测定硒带来影响.当HNO3、HClO4、H2O2的浓度小于0.5M
时也不干扰测定.原因是盐酸介质保持了较佳浓度,可是试样中的Fe、Cu和Ni等重金属元素形成络合物避免其干扰（1） ,这些与文献（3） ,报道是一致的.另外还采用低浓度硒的校准曲线,使试样中基体元素的浓度得到相对稀释（100倍以上）,因而更有效地消除血液,头发试样中基体元素对测定硒的干扰.
三 校准曲线法与标准加入法结果比较
在拟定的zui佳条件下, 准曲线法和标准加入法（图1）,对试样进行了测试.实验表明,尽管血液,头发试样中含有较复杂的基体元素,但用上述两种校准曲线所求得硒的含量是一只的.
从图1可以看出,三种校准曲线的斜率基本相同,回归分析后,相对系数均在0.9998以内.这也证明, 血液,头发中的基体元素对硒的测定均无影响.
四 本法的回收率及精密度
在血液,头发试样中分别添加硒标准,按试样处理步骤处理后进行测定,其回收结果见表2.五个平行样品的测定,方法的精密度在1.2~4.8%以内.
经过分析商业部食品检测科学研究所提供的一级标准物质（GBW08551）猪肝中的硒含量,标准值为0.94+0.05 ug·g-1 ,本法测定值为0.93+0.04 ug·g-1 ,准确度是令人满意的.
表 2 硒的回收率
样品 | 原含Se量（ppb） | 加入Se量（ppb） | 测得Se量（ppb） | 回收率（%） |
空白 | - | 100 | 100 | 100 |
血液A | 144.4 | 100 200 | 241.3 347.8 | 96.9 102 |
血液B | 246.0 | 200 300 | 442.8 544.9 | 98.4 99.6 |
头发C | 356.6 | 100 200 | 457.5 548.0 | 101 95.7 |
头发D | 665.1 | 200 300 | 864.6 95902 | 99.8 98.0 |
五 应用
用本法测定人体全血（177例）头发（327例）中硒的含量,其结果与文献报道值相近（4~11） .结果见表3.
表 3 人体全血,头发硒平均水平