正常情况下、外周血中,有形血细胞主要包括:
红细胞、白细胞和血小板三大类。
白细胞正常情况下又份为:有粒白细胞(中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)和无粒细胞(淋巴细胞和单核细胞)。这样白细胞就一共分出了五个类型,所以检测这白细胞的五个类型的相应血细胞分析仪就叫五份类血细胞分仪。
下面先看看各五种白细胞在正常情况下的细胞大小、细胞质的多少、细胞核的形状等物理结构。
细胞直径大小 | 细胞质 | 细胞核 | |
淋巴细胞 L | 6-12微米 | 少、嗜碱性 | 大、圆 |
单核细胞 M | 14-20微米 | 多、弱嗜碱性 | 卵圆形、肾形、马蹄形或不规则形 |
嗜中性粒细胞N | 10-12微米 | 细小均匀的嗜中性颗粒 | 杆状或分2-5叶、以3叶为主 |
嗜酸性粒细胞E | 12-15微米 | 大小一致、分布均匀的嗜酸性颗粒 | 常分2叶 |
嗜碱性粒细胞B | 10-12微米 | 大小不一、分布不均的嗜碱性颗粒 | 不规则、呈分叶状或S形 |
那么这五个类型的白细胞是根据什么原理来分类的呢?
目前主要是根据细胞的如下几个特性来分类:细胞的大小、核浆比例、细胞内细胞器的复杂程度、细胞核所含核酸的多少以及对某些化学试剂(或/和)荧光染液的敏感程度来区分之。
根据白细胞的以上特性,不同厂家、不同型号的五份类血细胞分析仪其检测分析的原理是不同的。但其最基本的原理目前无非就以下几种情况:
1、利用这五类细胞对不同化学试剂(溶血剂或叫溶血素)的溶解性质不同(如嗜酸细胞试剂和嗜碱细胞试剂)以及结合白细胞直方图细胞三分群的库尔特(电阻抗法)检测原理将白细胞分为五类。
例如:
早期的Abcus Junior5仪器,(行业内常称为假五分类),当然比起三分群的仪器分类精准了不少,但还是存在很大偏差,因为有些细胞是采用大小分群(即脉冲的大小)和计算出来的。
2、四角度照射法:
90°角区分分叶核细胞和单核细胞得到两类:
中性粒细胞和嗜酸性粒细胞(分叶核细胞);
单核细胞和淋巴细胞及嗜碱性粒细胞(单核的嗜碱性粒细胞)。
用90°偏振区分:
嗜酸性粒细胞和中性粒细胞。
用0°和10°通过核质比及细胞大小,将嗜碱性粒细胞从淋巴和单核细胞中群中分开。
用0°根据大小区分单核细胞和淋巴细胞。
此类仪器以优利特生产的URIT5160五分类为代表。
3、细胞化学-体积法:化学性溶血剂一方面作用于红细胞使红细胞破坏释放血红蛋白,另一方面还作用于白细胞,使白细胞膜表面产生小孔,细胞内浆质外溢,细胞失水皱缩,细胞膜紧贴于核上。测定时细胞的体积大小是核、颗粒和膜成分的总和,白细胞种类不同、分化程度不同所含的胞浆颗粒、核结构以及大小也不同。运用V.C.S三种探针,在流式通道的某一位点,对通过的单列白细胞,进行逐个的、同时的、三重的检测,以及三维分析,以确定其亚群性质。
V-低频波(Volume): 采用低频电流准确分析细胞体积;
C-高频波(Conductivity): 采样高频电流分析细胞核型;
S-激 光(Scatter): 该激光束可穿透细胞,探测细胞内核分叶状况和胞浆中颗粒情况,分析细胞的颗粒特性。
此类仪器以贝克曼库尔特为代表的LH750
4、利用半导体激光散射和核酸荧光染色技术
前向散射光:检测细胞的大小;
侧向散射光:检测细胞内细胞内容物的复杂程度;
侧向荧光: 检测细胞核酸的多少。