除非特殊说明,在所有情况下,所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的40~60倍。应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等色谱参数,比较液相色谱仪色谱柱性能的改善,以确定清洗的效果。确保色谱柱中没有样品盒缓冲溶液,清洗前所用的溶剂应与zui初清洗时所用的溶剂相溶。应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中zui后的溶剂相溶。
zui常见色谱柱再生用溶剂及其顺序见下表:
填料类型 | 再生用溶剂及其顺序 |
正相填料 | 用四氢呋喃冲洗;用甲醇冲洗;用四氢呋喃冲洗;二氯甲烷冲洗;用无本正己烷冲洗 |
反相填料 | 用HPLV级水冲洗,冲洗时进4等份的200µL二甲亚砜;用甲醇冲洗;用氯仿冲洗;用甲醇冲洗; |
阴离子交换填料 | 用HPLC级水冲洗;用甲醇冲洗;用氯仿冲洗 |
阳离子交换填料 | 用HPLC级水冲洗;在冲洗的过程中进4等份的200µL的DMSO;四氢呋喃清洗 |
蛋白质凝胶过滤填料 | 去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染有两种清洗/再生的方法:1弱保留蛋白质,用30mol/L pH3.0磷酸盐缓冲液冲洗;2强保留蛋白质,用100%的水到100%的乙腈梯度洗脱60min |
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