氨基酸序列测定实验——辅助方案

蛋白质样品

1 mol／L NaHCO3 （可选）100％ 冰冷乙醇(不含变性剂 USP 级)样品缓冲液 0.1％ （V／V）焦宁 Y 染料

超滤浓缩器／Speedvac蒸发器拉细的巴斯德吸管／凝胶加样吸头1.5 ml 微量离心管离心机

1. 必要时，用1 mol/L NaHCO₃将蛋白质样品的盐浓度调至 > 100 mmol/L。

2. 用超滤浓缩（按厂商说明）或真空浓缩（关键是当释放真空时，不要引入空气中的残屑）将样品体积浓缩至 50~100 μl, 移入 1.5 ml 微量离心管。

3. 样品加入 9 倍体积的冰冷 100％ 乙醇。在干冰中放置 1 h，或 -20°C 过夜。许多样品在这步就可以永久保存了。

4. 在最大速度下微量离心 15 min, 用拉细的巴斯德吸管或凝胶加样吸头吸去上清，保留沉淀。

5. 加入 10 ml 样品缓冲液，并用吸液器上下抽吸以溶解样品。在沸水浴中煮沸 3 min。

6. 样品加入 1μl 0.1％ 焦宁 Y （示踪染料），加样于微型凝胶。