用过甲酸氧化蛋白质是使蛋白质部分变性和稳定含硫氨基酸的一种简易而有效的方法。过甲酸氧化能定量地将半胱氨酸残基转化为胱氨酸，将甲硫氨酸残基转化为甲硫氨酸砜。这些残基对酸水解是稳定的。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。
| 试剂、试剂盒 | 过氧化氢甲酸 |
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| 仪器、耗材 | 冰 水浴锅 |
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| 实验步骤 | 材料与设备
过氧化氢（新鲜）（30%)
甲酸（可得的最高纯度级)
冰/水浴锅
操作程序
此操作程序系根据 Hirs(1967) 的方法修改而成。
1) 制备过甲酸试剂，将过氧化氢与甲酸以 1:19(v/v) 的比例（比如，0.5 ml 的过氧化氢和 9.5 ml 的甲酸) 混合在一起。室温（25℃) 下, 混合物必须严格地在密闭容器中静置整整 2 h。
2) 过甲酸试剂置冰/水浴中。将待氧化的蛋白质溶解于甲酸（通常浓度为 lmg/ml 时即可满足要求)。再将溶解的蛋白质样品置于冰/水浴中。让蛋白质样品和过甲酸试剂两者同时静置于冰/水浴中 30min，使之均至冰冷。
注：单有冰块不能使试管及冰/水浴锅冷却。
3) 加 2~3 倍（按体积）过量的过甲酸试剂于蛋白质样品。反应混合物在冰/水浴中孵育 2.5 h。
4) 加少量（总体积的 10%) 纯水（去离子水或蒸馏水）于反应混合物，彻底混匀。在真空离心机中挥发除去甲酸、过甲酸和水，至干。将蛋白质样品重溶于水，再用真空离心机重新干燥。
注：从有机酸如甲賅干燥蛋白质样品时，不会以白色或晶状物质出现，而是以透明的"玻璃"状出现。因此，不要期望能很容易地看见试管底部的干燥的蛋白质。如果举灯照射清洁的试管，则可由透射光的变化观察到干燥的蛋白质。 展开 |
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