1. 取材 用颈椎脱位法使胎大鼠迅速死亡。然后,把整个动物浸入盛有75%乙醇的烧杯中数秒钟消毒,取出后放在大平皿中携入超净台。用消过毒的剪刀剪开用碘酒和乙醇再次消毒后的皮肤,剖腹取出肝脏或肾脏,置于无菌平皿中。 2. 切割 用灭菌的PBS 液将取出的脏器清洗三次,然后用眼科手术剪刀仔细将组织反复剪碎,直到成1 mm3 左右的小块,再用PBS 清洗,洗到组织块发白为止。移入无菌离心管中,静置数分钟,使组织块自然沉淀到管底,弃去上清。 3. 消化、接种培养 吸取0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA 混合消化液1 ml,加入离心管中,与组织块混匀后,加上管口塞子,37 ℃水浴中消化8~10 分钟,每隔几分钟摇动一下试管,使组织与消化液充分接触,静止,吸去上清,向离心管中加入5~10 ml 含10%小牛血清的1640 培养基,用吸管吹打混匀,移入二个培养瓶中,置于二氧化碳培养箱中培养。 展开 |