1. 水样的采取(见「水中细菌总数的测定」实验)
2. 自来水检查
2.1 初(步)发酵试验
在 2 个含有 50 ml 三倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中,各加入 100 ml 水样。在 10 支含有 5 ml 三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中,各加入 10 ml 水样(如图 1)。混匀后,37℃ 培养 24 h,24 h 未产气的继续培养至 48 h。 图 1 多管发酵法测定水中大肠菌群的操作步骤和结果解释
2.2 平板分离
经 24 h 培养后,将产酸产气及 48 h 产酸产气的发酵管(瓶),分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上,再于 37℃ 下培养 18~24 h,将符合下列特征的菌落的一小部分,进行涂片,革兰氏染色,镜检。
2.2.1 深紫黑色、有金属光泽。
2.2.2 紫黑色、不带或略带金属光泽。
2.2.3 淡紫红色、中心颜色较深。
2.3 复发酵试验
经涂片、染色、镜检,如为革兰氏阴性无芽孢杆菌,则挑取该菌落的另一部分,重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中,每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落 1~3 个, 37 ℃ 培养 24 h,结果若产酸又产气,即证实有大肠菌群存在。
证实有大肠菌群存在后,再根据初发酵试验的阳性管(瓶)数查表 1,即得大肠菌群数。 表1 大肠菌群检表数 接种水样总量 300 ml(100 ml 2 份,10 ml 10 份)
3. 池水、河水或湖水等的检查
3.1 将水样稀释成 10-1 与 10-2 。
3.2 分别吸取 1 ml 10-2 、10-1 的稀释水样和 1 ml 原水样,各入装有 10 ml 普通浓度乳糖蛋白胨发酵管中。另取 10 ml 和 100 ml 原水样,分别注入装有 5 ml 和 50 ml 三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管(瓶)中。
3.3 以下步骤同上述自来水的平板分离和复发酵试验。
3.4 将 100、10、1、0.1(10-1)ml 水样的发酵管结果查表 2,将 10、1、0.1(10-1)、0.01(10-2)ml 水样的发酵管结果查表 3,即得每升水样中的大肠菌数。 表 2 大肠菌群检数表 接种水样总量 111.1 ml(100 ml、10 ml、1 ml、0.1 ml 各 1 份)
表 3 大肠菌群检数表 接种水样总量 11.11 ml(10 ml、1 ml、0.1 ml、0.01 ml 各 1 份) 展 |