实验概要
人流产胎儿成纤维细胞(Human fetal fibroblast)和包皮来源成纤维细胞的取材
主要试剂
细胞基础培养液、DPBS、0.25%Trypsin
主要设备
35 mm培养皿、4孔培养板、滤器、2 mL、5 mL、10 mL、15 mL、25 mL、50 mL离心管,T25培养瓶、细胞计数仪、巴斯德管、倒置显微镜、培养箱、水浴锅、生物安全柜、体视镜
实验材料
流产胎儿皮肤、包皮(取自医院,需签知情同意书)
实验步骤
①取流产胎儿腹部皮肤或者包皮约3 cm2,置于盛放DPBS的35 mm培养皿中,剪碎成1 mm2。
②收集组织块转移至15 mL离心管中,室温1000 r/min离心3 min。
③弃去上清,以细胞基础培养液重悬组织块,转移至T25培养瓶中,尽量使组织块均匀分布,同时小心吸去组织块周围的培养液。
④倒置培养瓶过夜,次日翻转,加入1.5 mL细胞基础培养液。
⑤隔日更换新鲜培养液,约7日可见组织块周围有细胞爬出
⑥0.25%Trypsin消化传代