植物组织直接PCR

实验概要

本实验以拟南芥叶片为试材介绍了一个不用提取DNA直接进行PCR的简单方法。

主要试剂

0.25N   NaOH

0.25N    HCl

NP-40缓冲液：0.5N Tris-HCI， pH8.0 ，25% NP-40

实验步骤

1. 取面积约为lmm²的植物叶片放在500ul离心管中，加入40ul的0.25N NaOH，在沸水中煮30秒。

2. 取出小离心管，再加40ul 0.25N HCL和20ul 1 NP-40缓冲液(0.5N Tris-HCL， pH8.0 25%NP-40 )，沸水中煮2分钟。

3. 室温下于12000g离心1分钟。弃上清。

4. 加入PCR反应混合液。

    5.0ul 10xPCR缓冲液(0.2M Tris-HCL， pH8.3， 15mM MgCL O. 5M KCL，1%明胶)

    5.0ul 10xd NTPs(2mM储液)

    2.5ul引物1 (10pmol/l)

    2.5ul引物2 (10pmol/l)

    0.2ul Taq酶(l0u/ul)

    34.8ul双蒸水。

5. 以50ul液体石蜡覆盖。在PCR仪上进行反应。

6. 通过琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物。