血红蛋白的测定

实验概要

掌握比色法测定动物的血红蛋白的含量。

实验原理

血红蛋白的颜色常与氧的结合量多少有关。但当用一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为稳定、棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋白（或高铁血红蛋白）的浓度成正比。可与标准色进行对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液中含血红蛋白克数（g•L^-1）。

主要试剂

 1%HCl、蒸镏水、99%酒精、乙醚、75%酒精.

主要设备

沙里氏血红蛋白计、小试管、刺血针或注射器，微量采血管，干棉球。

实验材料

鸡。

实验步骤

1.使用沙里氏血红蛋白计测定 

沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。 

（1）沙里血红蛋白计  

主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方形刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以g•dl^-1(每100 ml血液中所含血红蛋白的克数)表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从10%～160%。为避免所使用的平均值不一致，因此一般采用绝对值来表示。 

（2）具体测定方法如下： 

　　①用滴管加5～6滴，0.1mol•L^-1 HCl到刻度管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。 

　　②用微量采血管吸血至20 μl(方法同上述)，仔细揩去吸管外的血液。 

　　③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。操作时勿产生气泡,以免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。 

　　④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。 

　　⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色一致为止。 

　　⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中所含的血红蛋白的克数。比色前，应将玻棒抽出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液凹面最低处相一致的刻度为准。换算成每升血液中含血红蛋白克数（g•L^-1）。

注意事项

1.取血前要做好充分的消毒。 
 　

2.血液要准确吸取20 μl，若有气泡或血液被吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤方法是：先用清水将血迹洗去，然后再依次吸取蒸馏水、99%酒精、乙醚洗涤采血管1～2次，使采血管内干净、干燥。作为学生练习，微量采血管可反复使用。