流式细胞仪在医学研究与检验工作中的应用

流式细胞仪（flow cytometry, FCM）是一种对单细胞或其他生物粒子膜表面以及内部的化学成分进行快速定量分析与分选的医学仪器。它集光学、电子学、流体动力学、细胞化学、生物学、免疫学和计算技术于一体，可以高速度分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精密度高、准确性好等特点。目前，流式细胞仪已普遍应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等临床医学和基础医学研究领域。

　　1工作原理

　　流式细胞仪主要由液流系统、光学系统、检测系统和数据处理系统4部分组成，有些FCM还包括细胞分选系统。

　　当制备成单细胞悬液的待测细胞经特异性荧光染色后放入样品管中，通过充满鞘液的细胞流动室，在稳定的压力下细胞悬液保持在鞘液中心恒速流动，排成单列由喷嘴喷出，形成细胞液柱进入检测区域，细胞被激光激发后发出散射光与荧光，检测器根据光的强度，将光转变成与光量成比例的电脉冲，并使电脉冲经过放大处理后，将收集结果进行分析、比较和显示。此外，它还能在检测时根据液滴偏转原理进行分选。

　　2应用

　　21流式细胞仪在免疫学中的应用

　　目前，FCM用于免疫学基础研究和临床医学的各个方面［1］。它在临床医学中的应用，主要是流式免疫检测技术，它克服了传统免疫技术难以准确定量的不足，并且，可对单个细胞进行单色或同时多色荧光染色标记。

　　211淋巴细胞亚群分析自身免疫疾病、免疫缺陷性疾病、变态反应性疾病、病毒感染、恶性肿瘤等均有淋巴细胞亚群的异常改变。所以检测外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)及其比值（CD4+/CD8+）是反映机体免疫状态的重要参数之一。应用不同的CD系列的单克隆抗体，FCM能区分出不同的淋巴细胞亚群，并计算出他们的数量及相互间的比例，对控制这些疾病的发生发展、了解疾病的发病机制、指导临床治疗,都有极其重要的意义［2］。比如，由于HIV感染后CD4+细胞大量被破坏，致使CD4+/CD8+比例<1，因此检测CD4+T细胞的绝对值及其淋巴细胞中的比例对AIDS的确诊起重要作用。在严重急性呼吸综合征（SARS）患者中，FCM检测出84%的SARS患者淋巴细胞绝对计数降低，82%患者淋巴细胞百分率降低。从淋巴细胞亚群的分析结果看，SARS患者各类淋巴细胞亚群(T/B细胞、NK细胞)均受到不同程度的破坏。T细胞受损者最多(占95%)，T4细胞较T8细胞受损严重［3］。FCM的T细胞亚群测定还可用于监测移植后血液中或移植器官内免疫成分的变化，从而预测移植免疫排斥反应。如根据淋巴细胞的活化标志HLA-DR,配合分型标记物双标，可方便地测出活化的细胞毒T细胞和NK细胞，它们的升高意味着排斥反应发生的可能性增加。

　　212细胞特异性标记物的分析FCM能检测各种免疫细胞的特异性标志物及细胞内的各种细胞因子、表面受体（淋巴因子受体、干扰素受体、白细胞介素受体等）的定量分析，在冠心病、动脉粥样硬化、恶性肿瘤、自身免疫性疾病的临床应用相当广泛。细胞内的受体，如雌激素、糖皮质激素受体的检测，可指导乳腺癌的性激素治疗和糖皮质激素的治疗［3］。FCM与经典化学同位素标记测定受体法相比，优势在于它的单细胞测定可在混合细胞中选择性测定其中一群，可在同一群细胞中观察每个细胞上受体量的差异，并可将死细胞扣除［4］。