临床标本中分离金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌以及最近发现的肠球菌属少数菌株对青霉素、氨苄青霉素出现耐药。由于上述菌株产生 β-内酰胺酶水解前述抗生素。检测该酶有下列方法:
(一)微生物活性消失法
此法是以一株对青霉素高度敏感的枯草芽胞杆菌的指示菌,如待检菌株产生β内酰胺酶,破坏了青霉素,则在划线两边有枯草芽胞菌生长,否则指示菌仍呈很大抑菌环。具体操作结果解释参照《微生物学和微生物学检验》第115页,刘恭植主编,人民卫生出版社,1988年。
(二)淀粉-碘测定法
β内酰胺酶破坏β内酰胺环,碘与被打开β内酰胺环结合,使蓝色的淀粉-碘复合物转变成无色。
方法:用pH6.0磷酸缓冲液配制青霉素悬液 6000μg/ml,取该液0.1 ml置于微量稀释板凹孔中,挑选检测菌株数个菌落混悬于其中,摇动30min,静置室温中1h,加淀粉液2滴,再加碘液1滴,混合,立即观察颜色变化,阳性者当加入碘液后,首先立即出现蓝色、如在10min内消失蓝色,提示该菌产生β-内酰胺酶。
(三)酸测量法
青霉素被β-内酶胺酶水解后成青霉素酸,pH值下降6.8以下,用酚红指示剂,由红(紫)色 (原液:枸橼酸缓冲液pH8.5) → 黄色(pH6.8以下)。
(四)头孢硝基噻吩显色反应
头孢硝基噻吩(Nitrocefin)的β-内酰胺环被β-内酰胺酶打开,基质由黄色变成红色。
液体方法:10mg头孢硝基噻吩溶解于lml的二甲基亚砜中,然后用0.1mol/L PBS(pH7.0)再稀释 1:20,最后浓度为500μg/m1,溶液呈黄或淡橙色,保存4~10℃,可用几个星期。取该溶液0.05ml置放于微量稀释板凹孔中或小试管中,挑取被试菌落,制成浓厚悬液,与凹孔中基质液混和,室温10~ 30min,头孢硝基噻吩由黄变成红色为阳性,若显色不明显,观察可延长6h。
有报道纸片法用于流感嗜血杆菌和淋病奈瑟菌检测β-内酰胺酶的结果是准确的,但对于某些菌株产生少量而与菌细胞紧密结合的β-内酰胺酶,如腐生葡萄球菌等,用液体法检测更好。上述任何一种检测方法都应用质量控制。
一、名词解释:β-内酰胺酶http://www.antpedia.com/?uid-12922-action-viewspace-itemid-31066二、分析方法:β-内酰胺酶的检测http://......
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